Сравнительное изучение новых фотосенсибилизаторов на основе разработанных методических подходов в системе in vitro

• Автор: Плютинская, Анна Дмитриевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Молекулярные основы метода ФДТ

1.2. Фотосенсибилизаторы, применяемые в онкологии

1.3. Изучение фотосенсибилизаторов различных классов in vitro

Производные природного хлорофилла а и бактериохлорофилла а

Синтетические тетрагидро- и тетраазапорфирины

1.4. Этапы и биологические модели при изучении фотосенсибилизаторов

1.5. Критерии оценки выживаемости клеток в экспериментах in vitro

1.6. Накопление и локализация фотосенсибилизаторов в опухолевых клетках
1.7. Пути гибели опухолевых клеток при ФДВ: некроз и апоптоз
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Разработка методических подходов к изучению новых экзогенных ФС
в системе in vitro на опухолевых клетках человека
3.2. Изучение новых экзогенных фотосенсибилизаторов
3.2.1. Производные природного хлорофилла а
3.2.1.1. Производные пирофеофорбида а
3.2.1.2. Производные хлорина
Производные хлорина е6

Производные хлоринарв
3.2.2. Производные природного бактериохлорофилла а
Производные бактериохлорина р
3.2.3. Синтетические тетрагидропорфирины
3.2.4. Тетраазапорфирины (фталоцианины)
Отрицательно заряженные производные фталоцианина
Положительно заряженные производные фталоцианина
3.3. Изучение внутриклеточной локализации ряда красителей
методом КОМИРСИ
3.3.1. Пурпуринимиды
3.3.2. Отрицательно заряженные фталоцианины
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДМЕМ, МЕМ культуральные среды ДМСО диметилсульфоксид
ИК инфракрасный
ИК5о концентрация, при которой наблюдается 50% гибель
клеток
ИП ингибирование пролифирации клеток в культуре
КОМИРСИ метод конфокальной микроспектроскопии и
реконструкции спектральных изображений МТТ 3 -(4,5 -диметил-2-тиазолил)-2,5 -дифенилтетразолий
бромид
ФД флуоресцентная диагностика
ФДВ фотодинамическое воздействие
ФДТ фотодинамическая терапия
ФС фотосенсибилизатор
ЭТС эмбриональная телячья сыворотка
А549 аденокарцинома легкого человека
HeLa эпителиоидная карцинома шейки матки человека
НЕр2 эпидермоидная карцинома гортаноглотки человека
НТ29 карцинома толстой кишки человека
Raji лимфома Беркитта
OD оптическая плотность
Ps плотность мощности
Ws плотность энергии
IF интенсивность флуоресценции

спектральный диапазон от 600 до 900 нм) с оптическим разрешением 2 нм. Измерение флуоресценции проводили сразу после приготовления растворов фотосенсибилизаторов, через 2, 4 и 24 часа в стеклянных пробирках (ё=10мм), достигая выбранной концентрации путем последовательных разведений исходного раствора (1 мг/мл). В качестве растворителей использовали среду Игла, содержащую 7% ЭТС, 1% и 10% водные растворы Кремофора EL и Тритона Х-100. С каждого образца регистрировали по 3-4 спектра. При их математической обработке определяли интегральную интенсивность флуоресценции в пределах ±10 нм от спектрального максимума. Оценивали изменения в интенсивности флуоресценции и характере спектра в динамике.
4.3. Методика оценки фотостабильности фотосенсибилизаторов Исследование осуществляли следующим образом: в лунки
плоскодонного 96-луночного микропланшета (Coming, США) вносили по 150 мкл раствора фотосенсибилизатора выбранной концентрации в полной культуральной среде. Затем проводили облучение (доза света 5 и 10 Дж/см2). Спектры регистрировали до воздействия светом, через 5 и 10 минут после начала облучения. Время облучения рассчитывали, исходя из плотности мощности и заданной плотности энергии по формуле:
Ws=Psxt,
где Ws - заданная плотность энергии (Дж/см2), Ps-заданная плотность мощности (Вт/см2), t - время воздействия (сек). При их математической обработке определяли интегральную интенсивность флуоресценции в пределах ±10 нм от спектрального максимума.
4.4. Методика проведения фотодинамического воздействия на опухолевые клетки
Клетки рассевали в 96-луночные культуральные планшеты, инкубировали в течение 28 часов при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% двуокиси углерода (стандартные условия). Посевная концентрация клеток устанавливалась для каждой культуры с таким расчетом,