Стратегия применения эффекторов противоопухолевого иммунитета в адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований

• Автор: Шубина, Ирина Жановна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 364 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 Обзор литературы

1Л Принципы противоопухолевого иммунитета

1.1.1 Иммунологический надзор

1.1.2. Иммуноредактирование

1.2 Биотерапевтические (иимунотерапевтические) подходы к лечению

злокачественных заболеваний

1.2.1 Вакцинотерапия

1.2.2 Адоптивная иммунотерапия с применением лимфоцитов

ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования
2.1 Препараты, реактивы, оборудование
2.2 Методы исследования
2.3 Общие данные по пациентам и методика проведения пилотного 82 клинического исследования
ГЛАВА 3 Сравнительная характеристика активированных эффекторов
противоопухолевого иммунитета
3.1 Отработка условий генерации смешанной популяции цитокин- 86 активированных натуральных киллерных клеток (а-НК)
3.1.1 Выделение МНЛ из периферической крови
3.1.2 Генерация цитокин-активированных киллеров (смешанной популяции а- 87 НК)
3.2 Изучение особенностей морфологической, иммунофенотипической и 87 функциональной характеристики эффекторных клеток смешанной популяции
а-НК, генерируемых экстракорпорально для адоптивной иммунотерапии
3.2.1 Морфологические особенности смешанной популяции а-НК
3.2.2 Изучение иммунофенотипа смешанной популяции а-НК на разные сутки 95 культивирования
3.2.3 Анализ иммунофенотипа субпопуляции активированных НК (а-НК)
3.2.4 Оценка иммунофенотипа субпопуляции НКТ-клеток в цитокин- 106 активированной смешанной культуре а-НК
3.2.5 Анализ иммунофенотипа субпопуляции Т-регуляторных (Т-рег) клеток в 108 цитокин-активированной смешанной культуре а-НК
3.2.6 Оценка цитотоксической и пролиферативной активности смешанной 112 популяции а-НК
3.2.7 Изучение цитотоксической активности смешанной популяции а-НК по 118 отношению к культурам опухолевых и нетрансформированных клеток
различного гистогенеза
3.2.8 Анализ продукции цитокинов клетками смешанной популяции а-НК
ГЛАВА 4 Генерация смешанной популяции активированных НК-клеток из
различных источников
4.1 Получение смешанной популяции а-НК из экссудата, селезенки и

паратуморальных участков печени онкологических больных
4.1.1 Получение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови, экссудата, селезенки и паратуморальных участков печени онкологических больных
4.1.2 Методы оценки МНЛ и смешанной популяции а-НК, полученных из разных источников
4.2 Морфологические, функциональные и иммунофенотипические особенности смешанной популяции а-НК, генерированных из плеврального выпота онкологических больных
4.3 Характеристика и применение смешанной популяции а-НК, генерированных из селезенки онкологических больных
4.3.1 Характеристика больных и их лечения в пилотном исследовании по оценке иммунокррекции с помощью ИЛ-2/а-НК иммунотерапии
4.3.2 Смешанная популяция а-НК, генерированных из селезенки больных раком желудка после радикальной операции со спленэктомией
4.3.3 Применение смешанной популяции а-НК в пилотном исследовании по оценке иммунокррекции с помощью ИЛ-2/а-НК иммунотерапии у больных раком желудка после радикальной операции со спленэктомией
4.4 Характеристика функциональных свойств клеток смешанной популяции а-НК, генерированных из печени и паратуморального участка печени онкологических больных
4.5 Получение смешанной популяции мононуклеарных клеток из дренирующих опухоль лимфатических узлов онкологических больных
4.5.1. Получение биопсийного материала из лимфатических узлов и костного мозга онкологических больных
4.5.2 Определение опухолевых клеток в биопсийном материале с помощью методов иммуноцитохимии и магнитной сепарации
4.5.3 Выявление опухолевых клеток в биопсийном материале
4.5.4 Сравнительный анализ выявления опухолевых клеток в биопсийном материале лимфатических узлов и костного мозга при помощи методов иммуноцитохимии и магнитной сепарации
ГЛАВА 5 Индукция активированных лимфоцитов иммуномодуляторами различного происхождения
5.1 Методологический подход к исследованию влияния препаратов различного происхождения на активацию лимфоцитов
5.2 Пролиферативная активность МНЛ, под воздействием различных иммуномодуляторов
5.3 Цитотоксическая активность клеток МНЛ, под воздействием различных иммуномодуляторов
5.4 Иммунофенотипические особенности клеток смешанной популяции лимфоцитов, под воздействием различных иммуномодуляторов
ГЛАВА 6. Оценка возможности использования смешанной популяции а-НК в клинической практике при локорегионарном лечении злокачественных плевритов
6.1 Эффективность внутриплеврального введения ИЛ-2 и аутологичных а-НК при опухолевых плевритах
6.1.1 Пациенты
6.1.2 Методика внутриплевральной иммунотерапии
6.1.3 Методика получения аутологичных активированных лимфоцитов
6.1.4 Оценка результатов внутриплевральной ИЛ-2/а-НК и ИЛ

иммунотерапии
6.1.5 Цитологическая оценка в процессе проведения внутриплевральной ИЛ-2/а-НК и ИЛ-2 иммунотерапии
6.2 Эффективность внутриплеврального введения ИЛ-2 и аллогенных а-НК при опухолевых плевритах
6.2.1 Пациенты и методика проведения иммунотерапии
6.2.2 Оценка эффективности и побочной реакции при внутриплевральной иммунотерапии ИЛ-2 и ИЛ-2/аллогенные а-НК
6.2.3 Цитологическая оценка эффективности внутриплевральной иммунотерапии
6.3. Алгоритм проведения диагностики, мониторинга и лечения экссудативных опухолевых плевритов
ГЛАВА 7. Генерация и характеристика дендритных клеток — ключевых эффекторов противоопухолевого иммунитета
7.1. Характеристика дендритных клеток, получаемых из костномозговых предшественников мышей
7.1.1 Морфологическая характеристика дендритных клеток на разных этапах созревания
7.1.2 Иммунофенотипическая характеристика дендритных клеток на разных этапах созревания
7.1.3 Фагоцитарная активность дендритных клеток на разных этапах созревания
7.1.4 Продукция цитокинов дендритными клетками
7.1.5 Влияние дендритных клеток на пролиферативную активность лимфоцитов
7.2 Характеристика дендритных клеток, получаемых из моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров
7.2.1 Морфологическая характеристика дендритных клеток, получаемых из моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров, на разных этапах созревания
7.2.2 Иммунофенотипическая характеристика дендритных клеток, получаемых из моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров, на разных этапах созревания
7.2.3 Изучение апоптоза в популяциях дендритных клеток, генерированных из моноцитов/макрофагов периферической крови здоровых доноров, на разных этапах созревания
7.2.4 Оценка функциональной активности дендритных клеток при их воздействии на пролиферацию и цитотоксичность лимфоцитов, полученных из периферической крови здоровых доноров
7.3. Оценка комбинированного применения смешанной популяции а-НК и зрелых ДК для противоопухолевой иммунотерапии мышей ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ

Супрессивный эффект ганглиозадов в отношении ДК определяется известным анти-дендритно-поэтическим фактором VEGF опухолевого происхождения. [Gabrilovich DI. et al., 1996]. Рассматривая результаты о функциональных нарушениях опухоль-ассоциированных ДК, многочисленные литературные данные позволяют сделать предположение о том, что наличие ДК в опухолевой ткани ассоциируется с более благоприятным прогнозом и большим периодом выживаемости, а также со снижением уровня рецидивирования и метастазирования [Reichert ТЕ. et al., 2001]. В противоположность этому, у больных, у которых в опухоли определялось очень малое количество ДК, прогноз заболевания был неблагоприятный. [Murphy GF. et al., 1993]. В метастазах обнаруживалось меньше ДК, чем в первичной опухоли. В одном исследовании, проведенном на большой группе пациентов (п=132) с оральной карциномой, было показано, что количество ДК в опухолевой ткани было значительно более важным независимым прогностическим фактором для предсказания общей выживаемости, безрецидивного периода и времени до появления рецидивов, по сравнению с хорошо известными прогностическими факторами стадии заболевания или статуса лимфатических узлов [Reichert ТЕ. et al., 2001]. Предполагается, что не только количество ДК, но также наличие функционально не поврежденных Т-клеток в опухолевом микроокружении, передающих сигналы нормальным образом, имеет важное значение в общей выживаемости онкологических больных. [Reichert ТЕ. et al., 2001].
NK, NKT и уб Т -клетки. НК-клетки (CD3' CD56+ CD16+), которые опосредуют врожденный иммунитет и содержат в цитоплазме гранулы, богатые перфорином и гранзимом, обладают хорошим потенциалом, способствующему эффективному лизису опухолевых клеток. Хорошо известно, что НК-клетки представляют «первую линию защиты» организма против воздействия патогенов [Lanier LL. et al., 2003] однако опухолевые клетки человека устойчивы против перфорин-опосредованного лизиса, осуществляемого НК-клетками, кроме того, среди популяции ОИЛ редко выявляются FK [Whiteside TL., 2007] . И это несмотря на то, что в присутствии опухолевых клеток