Оценка трансфекции гена VEGF121 в мультипотентные стромальные клетки человека невирусными методами

• Автор: Смирнихина, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 86 с. : 10 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ
1Л. Актуальность проблемы
1.2. Цель и задачи исследования
1.3. Научная новизна
1.4. Теоретическая и практическая значимость
1.5. Положения, выносимые на защиту
1.6. Личное участие автора в получении результатов,
изложенных в диссертации
1.7. Апробация работы
1.8. Публикации
1.9. Структура и объем диссертации
ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Трансфекция МСК
2.2. Анализ функции трансфицированных генов
2.3. Влияние трансфекции на состояние стволовых клеток

(морфология, пролиферация)
2.4. Механизмы регуляции экспрессии трансфицированных генов
2.5. Способы регуляции экспрессии трансфицированных генов
2.6. Заключение
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы исследования
3.2. Методы исследования
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Мультипотентность и фенотип МСК
4.2. Результативность трансфекции
4.3. Межкультуральные различия при трансфекции плазмиды
с геном ЕЕСлР. ^
4.4. Динамика элиминации плазмиды из МСК при липофекции

и электропорации
4.5. Динамика экспрессии гена ГЕбТ
4.6. Анализ метилирования промотора плазмиды
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 6. ВЫВОДЫ
ГЛАВА 7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
293-EBNA1 - клеточная культура (от англ. Epstein-Barr virus nuclear antigen 1)
ЗТЗ - культура клеток эмбриональных фибробластов мыши (от англ. З-day transfer, inoculum 3 х 105 cells)
5-аза-С — 5-азацитидин ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота кДНК - комплементарная ДНК мРНК — матричная РНК
МСК - мультипотентные мезенхимные стромальные клетки
о.е. - относительные единицы
п.н. - пара нуклеотидов
РНК - рибонуклеиновая кислота
СК - стволовые клетки
СО - стандартное отклонение
ТЕ-буфер - буфер, состоящий из Трис и ЭДТА (от англ. Tris-EDTA) ТСА - трихостатии А
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота (от англ. ethylenediaminetetraacetic acid)
ANGPT1 - ген ангиопоэтина 1 (от англ. angiopoietin)
Bcl-2 — ген антиапоптотического белка (от англ. В-cell CLL/lymphoma) CMV — цитомегаловирус (здесь промотор плазмиды) (от англ. су tomegalo vi rus)
CpG-островок — последовательность ДНК, богатая CG-динуклеотидами, соединенными водородной связью
CSF - колониестимулирующий фактор (от англ. colony stimulating factor)
CYP27A1 - ген цитохрома Р450, семейство 27, подсемейство А1 (от англ. cytochrome Р450, family 27, subfamily Al)

метр Mettler Toledo (Италия), амплификаторы Bio-Rad (США), Eppendorf (Германия), ДНК-технология (Россия), проточный цитометр Flowmax (Partec, Германия).
Ферментные препараты
В работе использовании следующие ферментные препараты: коллагеназа I (ПанЭко, Россия), DNase, Hindlll (Promega, Германия), М-MuLV, ЕсоШ, M.Sssl (СибЭнзим, Россия), Taq-полимераза (Синтол и ДНК-Синтез, Россия) - в условиях, рекомендованных изготовителем.
Реактивы и расходные материалы
В работе использовали неорганические соли отечественного производства (Хеликон, ПанЭко; Россия) категорий «ОСЧ» и «ХЧ», а также фирмы «Sigma» (США). Все реактивы использовались без предварительной очистки. Олигонуклеотиды синтезированы биотехнологическими фирмами «ДНК-Синтез» и «Синтол» (Россия).
В работе использовали пластиковую посуду и расходные материалы европейских и американских производителей.
Культуры клеток
Культуры МСК-1 и МСК-2 были выделены из жировой ткани доноров женского пола, полученной в ходе плановой хирургической операции. От доноров были получены информированные согласия на использование клеток в эксперименте. Культуры МСК-3 - МСК-7 были любезно предоставлены лабораторией генетики стволовых клеток МГНЦ РАМН (руководитель - Д.В. Гольдштейн). Источник тот же - жировая ткань.
Прописи растворов, примененных в работе 1. PBS (1х)
1.7тМ дигидрофосфат калия (КН2РО4),