Генетическое разнообразие и анализ количественных признаков грибов рода Pleurotus

• Автор: Сиволапова, Анастасия Борисовна
• Шифр специальности: 03.02.12, 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 109 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Культивирование высших базидиальных грибов
1.2. Г рибы рода Pleurotus
1.3. Видовая идентификация
1.4. Применение молекулярно-генетических подходов в таксономии грибов
1.5. Генетика количественных признаков
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Объекты исследования
2.2. Культивирование штаммов вешенки
2.3. Получение плодовых тел P. djamor и P. sajor-caju in vitro
2.3.1. Подготовка посевного материала
2.3.2. Субстраты
2.3.3. Оценка урожайности
2.4. Определение факторов половой (гомогенной) несовместимости и отбор гаплоидных тестеров типов
спаривания для видов P. sajor-caju и P. ostreatus
2.5. Молекулярно-генетические методы при оценке генетического разнообразия рода вешенка
2.5.1. Подбор геноспецифических праймеров
2.5.2. Экстрагирование ДНК
2.5.3. ПЦР со специфичными праймерами
2.5.4. Секвенирование ДНК
2.5.5. Обработка результатов секвенирования 3
2.6. Анализ количественных признаков Pleurotus ostreatus
2.6.1. Получение плодовых тел P. ostreatus

2.6.2. Определение цвета шляпки
2.6.3. Оценка интенсивности плодоношения (урожайности)
2.6.3. Измерение скорости роста дикарионов
2.6.5. Составление генетической карты Pleurotus ostreatus
2.6.6. Статистическая обработка данных
Г лава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Культивирование P. sajor-caju и P. djamor
в лабораторных условиях
3.1.1. Получение плодовых тел P. djamor и P. sajor-caju
3.1.2. Оценка урожайности штаммов
P. sajor-caju и P. djamor
3.1.3. Получение тестерных штаммов
для вида P. sajor-caju
3.2. Генотипирование штаммов и видов
рода Pleurotus
3.2.1. ПЦР-диагностика 4
3.2.2. Секвенирование ITS-последовательностей
3.3. Установление таксономического статуса P. sajor-caju
3.3.1. Морфология плодовых тел культивируемых видов вешенки Pleurotus pulmonarius
и P. sajor-caju
3.3.2. Молекулярная идентификация вида P. sajor-caju
на основе ITS и IGS последовательностей кластера генов рРНК
3.3.2. Анализ половой совместимости между штаммами
P. sajor-caju и P. pulmonarius
3.4. Анализ количественных признаков Pleurotus ostreatus
3.4.1. Получение экспериментальной популяции
Pleurotus ostreatus
3.4.2. Оценка урожайности исследуемых штаммов P. ostreatus

3.4.3. Определение цвета плодовых тел Р.
3.4.4. Определение скорости вегетативного роста
3.4.5. Построение генетической карты Р. овіїеаіш
3.4.6. Изучение локусов количественных признаков (С>ТЪ), ответственных за урожайность, скорость вегетативного роста и цвет шляпок
плодовых тел Р. озіїеаШ
Глава 4. Заключение
ВЫВОДЫ
Список литературы
ПРИЛОЖЕНИЕ

2.5.3. ПТТР со специфичными праймерами
Все ПЦР осуществляли в общем объеме 50 мкл реакционной смеси на амплификаторе Атр1у4 (Вюкот). Особенности составов реакционных смесей и условия амплификации представлены в таблицах 3 и 4 соответственно.
Таблица 3. Концентрации компонентов в ПЦР.
Компонент реакции Концентрация
ПЦР-буффер 1 Ох
М8С12 25 мМ
смесь сГЫТР 200 мкМ каждого
Праймер 1 10 пМ
Праймер 2 10 пМ
ДНК-полимераза 2,5 ед./мкл
ДНК 100 нг/мкп
Общий объем реакции 50 мкл
Таблица 4. Параметры амплификации.
Цикл Количество повторов Этап т,°с Время
1 1 Преденатурация 94 4 мин
2 30 Денатурация 94 1 мин
Отжиг праймеров 55-58 45 с
Синтез ДНК 72 1 мин
3 2 Синтез ДНК 72 4 мин