Характеристика цитотоксических глюкозилтрансфераз Legionella pneumophila

• Автор: Совкова, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : ил.

Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Бактериальные токсины
1.1.1 .Механизмы действия бактериальных токсинов на клетку
1.1.1.1. Токсины, воздействующие на клетку снаружи
1.1.1.2. Токсины, подавляющие синтез белка эукариотической клетки
1.1.1.3. Токсины, влияющие на митотический цикл эукариотической
клетки
1.1.1.4. Токсины, влияющие на процессы экзоцитоза эукариотической
клетки
1.1.1.5. Токсины, влияющие на передачу сигналов в эукариотической
клетке
1.1.1.6. Токсины, влияющие на актиновый скелет эукариотической
клетки
1.2. Токсические факторы бактерий с глюкозилирующей активностью
1.3. Глюкозилтрансфераза Lgtl L. pneumophila - родоначальник новой группы бактериальных эффекторов системы IV типа секреции
1.4. Заключение
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Материалы для клонирования
2.1.2. Реактивы
2.1.3. Вещества, используемые при культивировании
2.1.4. Бактериальные штаммы и клеточные линии
2.1.5. Материалы для хроматографии
2.1.6. Радиоактивные материалы
2.1.7. Лабораторное оборудование
2.2. Методы
2.2.1. Культивирование бактериальных штаммов
2.2.2. Постановка ПЦР
2.2.3. Молекулярное клонирование фрагментов ДНК
2.2.4. Экспрессия рекомбинантных белков
2.2.5. Определение концентрации белков
2.2.6. Электрофорез в SDS - полиакриламидном геле
2.2.7. Ферментативные исследования
2.2.8. Введение рекомбинантных белков в эукариотические клетки методом
электропорации
2.2.9. Реакция транскрипции/трансляции in vitro
2.2.10. Определение уровня белкового синтеза в клетках
2.2.11. Изучение внутриклеточной инфекции Acanthamoeba castellanii
2.2.12. ПЦР в режиме реального времени
2.2.13. Определение антигенной специфичности белков методом
иммуноблоттинга
2.2.14. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Обнаружение генов потенциальных глюкозилтрансфераз в секвенированных геномах L. pneumophila
3.2. Клонирование и экспрессия генов lgt2 и lgt
3.3. Глюкозилирующая активность новых белков L. pneumophila - Lgt2 и

3.4. Механизм реакции глюкозилирования при участии Lgt L.
pneumophila
3.5. Ингибирование белкового синтеза и цитотоксическая активность Lgt, Lgt2 и Lgt
3.6. Продукция глюкозилтрансфераз L. pneumophila in vitro
3.7. Продукция глюкозилтрансфераз L. pneumophila in vivo
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
Список использованной литературы

вызывать апоптоз и затем покидать клетку (Molmeret М., А1Н O.A. et al., 2002; Watarai M., Derre I.et al., 2001; Hilbi H., Segal G. et al., 2001; Gao L.-Y., Abu Kwaik Y., 1999; Zink S.D., Pedersen L. et al., 2002; Gao L.-Y., Kwaik Y. Abu, 2000; Alli
O.A.Т., Gao L.-Y. Et al., 2000; Molmeret M., Alli O.A. et al., 2002). Структурная организация этой системы достаточно хорошо изучена и имеет гомологию с системами транспорта IV типа других патогенных бактерий, таких как В. pertussis, Agrobacterium tumefaciens, H. pylori и Brucella. (Marra A., Blander S. J. et al., 1992; Vogel J. P., Andrews H. L. et al., 1998).
Система Dot/Icm L. pneumophila кодируется генами, располагающимися в двух 20 kb областях хромосомы, которая может, по крайней мере, в некоторых штаммах, образовывать единый остров патогенности (Vogel and Isberg, 1999; Brassinga et al., 2003). Система Dot/Icm состоит из 26 генов, которые в геноме образуют два региона. Регион I содержит семь генов (dotDCB, icmWX, и icmV/dotA). Регион II состоит из 19 генов (icmTSRQPONMLKEGCDJB и icmHF). Локализация генов системы icm/dot показана на рис. 2.
Region I
dot clot ______icm
A V W X
TSROP O NMLK E GCDJ В tphA F H
r) ^iiiniijb imiiniTTpfc. I n) mft гг1"Г> ixxxxк^тнпгя Лол
M L KJIH G FEPNO
________________________dot
Рис. 2. Локализация генов icm/dot (icm - гены, «отвечающие за внутриклеточное размножение», dot - гены, «дефектные в транспорте органелл»). Большинство из генов имеют по два обозначения, отражающие их независимое обнаружение двумя группами исследователей (dot гены показаны под стрелками, icm гены показаны над стрелками).

липопротеин цитоплазм, белки мембран, белки периплазм, белки
Значительный прогресс в понимании функционирования системы секреции IVB типа легионелл был достигнут после биохимической идентификации в 1993 г. некоторых белков, образующих эту систему (Berger, Isberg, 1993).