Совершенствование методов индикации генома вируса африканской чумы свиней в объектах ветеринарного надзора

• Автор: Газаев, Исмаил Хизирович
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 134 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ
1Л Актуальность темы
1.2 Степень разработанности проблемы
1.3 Цель и задачи исследований
1.4 Научная новизна результатов исследований
1.5 Практическая значимость работы
1.6 Апробация работы
1.7 Соответствие диссертации паспорту научной специальности
1.8 Публикации
1.9 Объем и структура диссертации
1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1.11 Личный вклад автора в выполнение работы
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Характеристика вируса АЧС
2.2 Эпизоотическая ситуация по АЧС в мире и РФ
2.3 Пути распространения вируса АЧС
2.4 Сохраняемость вируса АЧС
2.5 Патогенез и клинические проявления болезни
2.6 Лабораторная диагностика АЧС
2.7 Генотипирование вируса АЧС
2.8 Заключение по обзору литературы
3.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1 Материалы
3.1.1 Вирус
3.1.2 Животные
3.1.3 Культура клеток
3.1.4 Бактериальный штамм и плазмида

3.1.5 Растворы и реактивы
3.1.6 Лабораторное оборудование
3.2 Методы
3.2.1 Подготовка проб органов для выделения вируса
3.2.2 Выделение вируса
3.2.3 Экспериментальное заражение животных
3.2.4 Отбор проб объектов ветнадзора
3.2.5 Выделение и очистка нуклеиновых кислот
3.2.6 Постановка ПЦР в реальном времени для выявления ДНК вируса АЧС
3.2.7 Клонирование ПЦР фрагмента в плазмидном векторе
3.2.8 Нуклеотидное секвенирование и филогенетический анализ изолятов
вируса АЧС
3.2.9 Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
3.2.10 Статистическая обработка результатов исследований
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Разработка и усовершенствование тест-системы для выявления генома вируса АЧС методом ПЦР в реальном времени
4.2 Разработка метода ПЦР в реальном времени для обнаружения ДНК вируса АЧС с использованием внутреннего контрольного образца (ВКО)
4.2.1 Подбор оптимального метода выделения ДНК вируса АЧС из объектов ветеринарного
надзора
4.2.2 Конструирование рекомбинантной плазмиды на основе вектора рТ7 57 К/Т
4.2.3 Оптимизация условий постановки мультиплексной ПЦР в реальном времени
4.3 Экспериментальное заражение животных вирусом АЧС

4.4 Сохраняемость вируса АЧС в продуктах свиного происхождения, хранящихся при разных температурных
режимах
4.5 Влияние сроков хранения проб при различных температурных режимах на возможность выявления ДНК вируса АЧС методом ПЦР в реальном времени
4.6 Мониторинг африканской чумы свиней
4.7 Мониторинг клещей обитающих на территории Южного федерального округа
4.8 Филогенетический анализ изолятов, выделенных при вспышках африканской чумы свиней в Российской Федерации в 2008-2011 гг
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

[ЮеНюекег в.В., 1998; К1е1Ьоекег Б.В., 1999; К1е1Ьоекег 8.В., 2001].
Как показали последние исследования в Португалии, именно с клещами связана длительная персистенция вируса среди домашних свиней, а также наличие большого количества серопозитивных животных в хозяйствах, где не наблюдалось клинических признаков АЧС. В провинции А1еп1е]о, где произошла вспышка этой болезни в 1999 г., было выделено 6 гемадсорбирующих и 4 негемадсорбирующих изолята вируса из клещей ОгшИтобогоя еггабсия. Гемадсорбирующие изоляты вызывали острую форму АЧС. Свиньи, инфицированные негемадсорбирующими изолятами, оказались полностью устойчивыми или же имели 2-недельную задержку в появлении клинических признаков болезни при контрольном заражении патогенным португальским изолятом. Интересно, что негемадсорбирующие изоляты более чем в 2 раза труднее передавались контактным путём по сравнению с гемадсорбирующими. Вероятно, благодаря различию в клинической картине, имеющей место у изолятов, выделенных от клещей, а также за счёт своеобразной перекрёстной защиты, продуцируемой непатогенными изолятами, и появляется значительное число серопозитивных свиней без клинических признаков АЧС [Вошая 2004].
Таким образом, анализ литературных данных свидетельствует о роли различных природных резервуаров в распространении вируса АЧС.
2.4 Сохраняемость вируса АЧС
Вирус АЧС исключительно устойчив в широком диапазоне температур и pH среды, включая высушивание, замораживание и гниение. Он может оставаться жизнеспособным в течение длительного времени в фекалиях, крови, почве и на различных поверхностях - деревянных, металлических, кирпичных [Коваленко Я. Р., 1972; СюринВ.Н., 1998].
Продолжительную устойчивость возбудителя в крови, экскретах и трупах учитывают при планировании ветеринарно-санитарных