Сравнительный анализ изоферментов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы человека : эволюция и физико-химические свойства

• Автор: Куравский, Михаил Львович
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 225 с. : ил.

1. Содержание
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Соматический изофермент глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы
2.2. Энергетический метаболизм и подвижность сперматозоидов
2.2.1. Строение сперматозоида млекопитающих
2.2.2. Строение и функции фиброзного слоя жгутика сперматозоида
2.2.3. Роль гликолиза в энергообеспечении сперматозоида
2.2.4. Спермоспецифические формы гликолитических ферментов
2.3. Сперматозоидный изофермент глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы
2.3.1. Ранние исследования: вАРОБ является одним из компонентов фиброзного слоя жгутика сперматозоида
2.3.2. САРОБ присутствует в сперматозоидах различных видов млекопитающих
2.3.3. Ы-концевой домен связывает ИАРОБ с другими белками фиброзного слоя
2.3.4. Происхождение гена САРОБ
2.3.5. Экспрессия вАРИБ регулируется на уровне трансляции
2.3.6. САРОБ необходима для подвижности сперматозоидов
2.3.7. Энзиматические свойства и олигомерный состав САРОБ
2.3.8. Правильное сворачивание САРОБ может обеспечиваться шаперонином ТШС
2.3.9. Роль БАРОБ в патогенезе
2.3.10. САРОБ как мишень для специфического ингибирования
2.4. Заключение
3. ПРОИСХОЖДЕНИЕ И ЭВОЛЮЦИЯ ГЕНА САР
3.1. Материалы и методы
3.1.1. Выявление генов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназ
3.1.2. Множественное выравнивание и реконструкция филогенетических деревьев
3.1.3. Анализ синтений
3.1.4. Оценка воздействия естественного отбора на последовательности генов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназ

3.2. Результаты
3.2.1. Последовательности генов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназ
3.2.2. Тканеспецифическая экспрессия полипролинового домена GAPD-
3.2.3. Реконструкция филогении генов глицералъдегид-3-фосфатдегидрогеназ
3.2.4. Оценка давления естественного отбора
3.3. Обсуждение результатов
3.3.1. Филогения генов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназ
3.3.2. Специализация GAPD-2 в спермоспецифический белок
3.4. Заключение
4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОЙ GAPDS
4.1. Материалы и методы
4.1.1. Материалы
4.1.2. Аналитические методы
4.1.3. Иммуноблоттинг
4.1.4. Методы генетической инженерии
4.1.5. Выделение белков
4.2. Результаты и их обсуждение
4.2.1. Экспрессия полноразмерной GAPDS
4.2.2. Экспрессия GAPDS, лишенной полипролинового домена (dN-GAPDS)
4.2.3. Выделение dN-GAPDS из бактериального экстракта
4.2.4. Каталитические свойства dN-GAPDS
4.2.5. Олигомерный состав dN-GAPDS
4.2.6. Устойчивость dN-GAPDS к денатурации
4.2.7. Причины повышенной устойчивости dN-GAPDS к денатурации
4.2.8. Дестабилизация dN-GAPDS путем введения в ее последовательность точечных мутаций
4.2.9. Взаимодействие dN-GAPDS с коферментом
4.2.10. Влияние точечных мутаций на кооперативность связывания кофермента
4.3. Заключение
5. ЭКСПРЕССИЯ GAPDS В МЕЛАНОМНЫХ КЛЕТКАХ
5.1. Материалы и методы
5.1.1. Материалы
5.1.2. Определение концентрации антител
5.1.3. Иммунохимические методы
5.1.4. Выделение поликлональных антител против dN-GAPDS
5.2. Результаты и их обсуждение
5.2.1. Экспрессия dN-GAPDS в норме и при заболеваниях
5.2.2. Получение поликлональных антител против нативной и денатурированной конформаций dN-GAPDS
5.2.3. Детекция GAPDS в меланомных клетках
5.3. Заключение
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Табл. 2. Гликолитические ферменты человека и кодирующие их гены.
Название фермента Название гена итРпИ: АС Комментарии
Гексокиназа НК1 Р19367 Сперматозоидные транскрипты, кодирующие НК
НК2 Р52
НКЗ Р52
6СК Р35
НК0С1 (}2ТВ
Глюкозо-6-фосфатизомераза СР1 Р06
Фосфофруктокиназа РИКМ Р08237 Сперматозоидные транскрипты, кодирующие РРКМБ
РРКЬ Р17
РРКР (201
Альдолаза АЬЭОА Р04075 Сперматозоидный транскрипт, кодирующий АЬООА_У
АЬЭОВ Р05
АЬООС Р09
Триозофосфатизомераза ТРИ Р60174 Сперматозоидный транскрипт с удлиненным З'-иТЯ
Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа бАРОН Р04
САРОНБ 014556 Сперматозоидный изофермент вАРОБ
Фосфоглицераткиназа Р6К1 Р00
РСК2 Р07205 Сперматозоидный изофермент РСК
Фосфоглицератмутаза Р6АМ1 Р18
РСАМ2 Р15
Р6АМ4 08И0У7 Сперматозоидный изофермент РСАМ
РбАМ5 096Н
Енолаза ЕЖИ Р06
ЕЫ02 Р09
ЕЫОЗ Р13
ЕЖ>4 АбЫЫУУб
Пируваткиназа РКП! Р30
РКМ Р14618 Сперматозоидный транскрипт, кодирующий РК-Б
Лактатдегидрогеназа ЬЭНА Р00
ЬОНВ Р07
ЬОНС Р07864 Сперматозоидный изофермент ЬБНС
ЮНО (}86Ши
ЮНАЬбА §б1мкз Сперматозоидный изофермент ЮНАЬбА
ЮНАЬбВ 09ВУ22 Сперматозоидный изофермент ЬОНАЬбВ