Особенности микробного пейзажа, эндотоксинемии и показателей гемостаза у женщин с бактериальным вагинозом

• Автор: Гайсина, Юлия Рамилевна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Челябинск
• Количество страниц: 92 с. : 17 ил.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
AT III - антитромбин III
АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время
БВ - бактериальный вагиноз
ИФА - иммуноферментный анализ
JIAJI - лизат амебоцитов Limulus
ПВ - протромбиновое время
ЛПС - липополисахарид
ПЦР - полимеразно-цепная реакция
РФМК - растворимые фибрин-мономерные комплексы
ЭТ - эндотоксин
BPI - бактерицидный белок гранул нейтрофилов, повышающий проницаемость бактерий (bactericidal/permeability-increasing protein)
EndoCAb - антитела к соге-региону липополисахарида (endotoxin-core antibody)
IgG - иммуноглобулин класса G IL - интерлейкин
LBP - липополисахарид-связывающий белок (lipopolysaccharide binding protein)
PrC - протеин С
TNF-a - фактор некроза опухолей a СРБ - С-реактивный белок vWF - фактор Виллебранда

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Этиология и патогенез дисбиотического нарушения микр о биоценоза влагалища у женщин репродуктивного возраста
1.2. Липополисахариды грамотрицательных бактерий, их физиологические эффекты и роль в патогенезе бактериального вагиноза
1.3. Влияние микробных эндотоксинов на систему гемостаза
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Обследованный контингент
2.2. Бактериоскопический метод
2.3. Культуральный метод
2.4. Молекулярно-биологический метод (ПЦР)
2.5. Определение уровня антител к возбудителям уреаплазменной и мико-плазменной инфекций методом ИФА
2.6. ЛАЛ-тест - определение концентрации липополисахаридов в плазме крови
2.7. Определение концентрации человеческого ЬВР (липополисахаридсвя-зывающего белка), бк соге-региону липополисахарида, цитокинового профиля, С-реактивного белка в плазме крови методом ИФА
2.8. Определение скрининговых параметров гемостаза (АЧТВ, ПВ, уровень фибриногена), маркеров дисфункции эндотелия (фактор Виллебранда, эн-дотелин-1, бРЕСАМ-Г зУСАМ-!), активации свертывания (РФМК, Э-димер) и антикоагулянтной системы (АТ-1П, протеин С)
2.9. Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Состояние вагинальной микрофлоры у женщин репродуктивного возраста
3.2 Эндотоксинемия, выраженность антиэндотоксинового иммунитета и острофазного ответа у женщин с дисбиозом влагалища

3.3 Состояние гемостаза и маркеры дисфункции эндотелия при эндотокси-немии, ассоциированной с БВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2.6. JlAJI-тест - определение концентрации липополисаха ридов в плазме крови
Для определения уровня ЛПС использовали хромогенный метод с тест-набором ENDOSAFE® ENDOCHROME™ производства «HyCult biotechnology» (Голландия) на ИФА-анализаторе «BioRad iMark» (США). Тест основан на способности липополисахарида вызывать коагуляцию белковых фракций гемолимфы амебоцитов краба Limulus polyphemus. При этом в результате ферментативной реакции расщепления р-нитроанилина образуется желтое окрашивание, интенсивность которого измеряется при длине волны 405 нм с помощью спектрофотометра. Предел чувствительности метода - 0,01 EU/мл, диапазон измеряемых концентраций - от 0,01 до 10 EU/мл.
Материалом для исследования служила свежезамороженная ЭДТА плазма, длительность хранения которой не превышала 20 дней при температуре минус 20 градусов. Первый этап включал в себя внесение в лунки (50 мкл) растворенного реагента LAL, в лунки с контролями образцов вместо реагента LAL, по 50 мкл EFW. Проводилась инкубация 30 минут при комнатной температуре, после чего останавливали реакцию добавлением (50 мкл) разведенного стоп-раствора, содержащую 50 % уксусную кислоту. Помещали планшет в спектрофотометр «BioRad» (США), и измеряли абсорбцию при 405 нм, концентрацию эндотоксина в образцах определяли из калибровочной кривой на основе стандартных концентраций эндотоксина: 10, 3.30, 1.10, 0.40, 0.12, 0.04, 0.01, 0.0 ЕЭ/мл. Нормальная физиологическая концентрация ЛПС в плазме крови составляет от 0-1 EU/мл [12].
2.7. Определение концентрации человеческого липополисахаридсвя-зывающего белка, Ig G к соге-региону липополисахарида, цитокино-вого профиля, С-реактивного белка в плазме крови методом ИФА
Для оценки выраженности антиэндотоксинового иммунитета у женщин с БВ использовали количественный метод определения человеческого