Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Москалева, Наталья Евгеньевна
03.01.04
Кандидатская
2013
Москва
192 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
СОДЕРЖАНИЕ
1 ВВЕДЕНИЕ. Актуальность проблемы.
2 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. Методы анализа активности и содержания цитохромов Р
2.1 Методы анализа цитохромов Р450 в биологических объектах.
2.1.1 Дифференциальная спектроскопия
2.1.2 Оценка уровня экспрессии цитохромов Р450 по количеству соответствующей мРНК
2.1.3 Иммунологические методы анализа
2.2 Методы протеомного анализа цитохромов Р
2.2.1 Методы предварительного разделения белков суперсемейства Р450 в протеомике
2.2.2 Масс-спектрометрический анализ цитохромов Р450.
2.2.2.1 Идентификация цитохромов Р450 в биологических объектах методами масс-спектрометрии.
2.2.2.2 Методы количественного масс-спектрометрического анализа.
2.2.3 Особенности абсолютного количественного анализа
цитохромов Р
2.2.3.1 Выбор масс-спектрометрического оборудования.
2.2.3.2 Получение стандартов для построения калибровочных кривых
2.2.3.3 Относительное масс-спектрометрическое количественное определение цитохромов Р450 без использования изотопной метки
2.23 А Использование методов с введением изотопной метки для масс-спектрометрического анализа цитохромов Р
2.3 Фенотипирование как способ оценки функционального состояния монооксигеназной системы
2.3.1 Методы, основанные на измерении радиоактивности.
2.3.2 Биолюминесцентные методы.
2.3.3 Электрохимические методы оценки актиности цитохромов Р
2.3.4 Флуоресцентный метод как один из наиболее распространенных при оценке активности цитохромов Р450.
2.3.5 Методы, основанные на ВЭЖХ с ультрафиолетовым и масс-спектрометрическим детектированием.
2.4 Сопоставление параметров активности цитохромов Р450 с количественным содержанием.
2.5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
3.1.1 3.1.2.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Качественный и количественный анализ цитохром ов 52 Р450 в микросомах печени мыши
Подготовка проб макросом печени мыши к масс- 52 спектрометрическому анализу.
Проведение гидролитического ферментативного 52 расщепления белков микросомальной фракции.
Приготовление "небелковой матрицы" для калибровочных 53 стандартов
Общее протеомное профилирование макросом печени мыши 53 для идентификации и выявления протеотипических пептидов цитохромов Р450 при помощи ионной ловушки и <2-ТСЖ
Количественный анализ выбранных изоформ цитохромов 55 Р450 с использованием QQQ■
Синтез пептидов
Приготовление стандартов исследуемых пептидов 59 цитохромов Р450 и построение калибровочной кривой Количественный анализ с использованием изотопно-
меченых пептидов в качестве внутреннего стандарта.
Определение активности цитохромов Р450 к маркерным
субстратам
экспоненциально модифицированное отношение числа обнаруженных пептидов, к числу пептидов, которые можно детектировать для данного белка.
РА1 ^обн^теор-
где N06« - число пептидов, обнаруженное для исследуемого цитохрома Р450 при обработке данных протеомного анализа, а - Кгсор, теоретически возможное число пептидов.
ешРА1 = 10РЛ1-1.
Для оценки относительного содержания изоформы от общего количества цитохромов Р450 авторы использовали формулу,
содержание (%) = [(етРА1 ■ Мг)/£(етРА1 • Мг)] -100,
где Мг - молекулярная масса изоформы, а Х(етРА1 • Мг)] сумма произведений етРА1 и Мг для всех обнаруженных изоформ цитохромов Р450.
На основании полученных данных идентифицированные изоформы Р450 были разделены на три категории - с высокой, средней и низкой концентрацией. Согласно расчетам исследователей, высокую концентрацию имеют изоформы цитохромов Р450 1А2, 2А6, 2С9, 2Е1 и ЗА4, содержание каждой из которых составляет около 10% от общего количества цитохромов Р450, среднюю - 2С8, 4А11 и 4Р2 (0,5-1%) и
группа цитохромов с низкой концентрацией (<0,5%) представлена изоформами СУР2В2, СУР2П, СУР4Р11, СУР4Р12, СУР4У2, СУР7В1, СУР8В1, СУР20А1 и СУР51А1. Однако авторы отмечают, что количественные оценки по ешРА1 сильно зависят от метода анализа и аналитического оборудования [78]. Так, например, изоформу СУРЗА4 анализировали тремя методами; при этом анализ при помощи ионной
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Идентификация и исследование функций НАДН-зависимой редуктазы внешних отделов митохондрий, ответственной за активацию ксенобиотиков | Никифорова, Анна Борисовна | 2015 |
Исследование иммунохимических и биохимических свойств N-концевого фрагмента предшественника натрийуретического пептида В-типа человека | Сеферян, Карина Рубеновна | 2010 |
Вирусные и невирусные методы введения в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот | Ризванов, Альберт Анатольевич | 2010 |