Диссертация на тему "Гены-мишени фармакологического действия бромпроизводного 2-аминоадамантана-ладастена в клетках головного мозга крыс", скачать бесплатно автореферат по специальности 03.00.03

Оглавление

Список сокращений и условных обозначений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Общая характеристика производных адамантана и их использование в практике

1.2 Физико-химические и фармакологические свойства ладастена

1.2.1 Физико-химические свойства и особенности фармакокинетики

1.2.2 Фармакологические свойства ладастена

1.2.2.1 Нейропсихотропные свойства

1.2.2.2 Иммунотропные свойства

1.2.2.3 Актопротекторные свойства и метаболические эффекты препарата
1.3 Новые подходы к исследованию молекулярных механизмов действия фармакологических средств
1.3.1 Методы изучения генной экспрессии
1.3.1.1 ДНК-гибридизация на микрочипах
1.3.1.2 ОТ-ПЦР в режиме реального времени
1.3.2 Методы изучения экспрессии белков
1.3.2.1 Двумерный электрофорез
1.3.2.2 Масс-спектрометр ия
Глава 2. Объекты и методы исследований
2.1 Препарат
2.2 Объекты исследований
2.3 Выделение суммарной РНК из головного мозга крыс
2.4 Гибридизация на макрочипах
2.5 Анализ изображений радиоавтографов

2.6 Построение кДНК с помощью обратно-транскрипционной реакции
2.7 Количественная ОТ-ПЦР в режиме реального времени
2.8 Двумерный электрофорез белков
2.9 Анализ изображений двумерных электрофореграмм
2.10 Гидролиз белков и МАГОГТОГ масс-спектрометрия
Глава 3. Результаты исследований
3.1 Анализ дифференциальной экспрессии генов в клетках головного мозга крыс при однократном воздействии ладастена на чипе, содержащем 588 фрагментов генов
3.2 Анализ дифференциальной экспрессии генов в клетках головного мозга крыс при однократном воздействии ладастена на чипе, содержащем 1176 фрагментов генов
3.3 Подтверждение дифференциальной экспрессии генов, идентифицированных в результате гибридизации на кДНК макрочипах, методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени
3.4 Поиск и идентификация белков-мишеней ладастена
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1 Поиск и идентификация генов - мишеней ладастена
4.1.1 Гены ферментов различных метаболических путей
4.1.2 Гены регуляторных нейропептидов и их рецепторов
4.1.3 Гены мембранных транспортеров
4.1.4 Гены белков синаптических функций
4.1.5 Г ены белков цитоскелета и межклеточных взаимодействий
4.1.6 Г ены, кодирующие компоненты сигнальных путей
4.1.7 Г ены опухолевых супрессоров
4.2 Поиск и идентификация белков - мишеней ладастена
4.2.1 Белки-ферменты гликолитического метаболизма
4.2.2 Стрессовые белки и белки- шапероны

4.2.3 Защитные белки
4.2.4 Синаптические белки
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

исследователей Стэндфордского университета под руководством Patrick О. Brown (Schena et al., 1995).
Технологические успехи последних лет, достигнутые в разработке и создании микрочипов, создали новую концепцию сравнительного изучения уровней экспрессии от нескольких сотен до нескольких тысяч различных генов одновременно (Chen-An et all, 2003). Столь большое разнообразие генов-мишеней может быть иммобилизовано на твердую поверхность ДНК-чипа с высокой плотностью в виде кДНК клонов из геномных библиотек, очищенных Г1ЦР фрагментов охарактеризованных и еще неохарактеризованных генов, либо специально разработанных
олигонуклеотидов. Создание чипов на основе кДНК клонов библиотек, приготовленных из любой интересующей ткани, позволяет производить обнаружение новых генов, остальные вышеперечисленные пробы позволяют измерить экспрессионный статус интересующих генов (Kontkanen, 2002).
Небольшие фрагменты ДНК иммобилизуют на поверхности чипа в виде определенным образом расположенных “микропятен”, которые далее используются для гибридизации с анализируемыми образцами нуклеиновых кислот. При совпадении первичной структуры ДНК “микропятна” и анализируемого образца на поверхности стекла образуются ДНК-ДНК-гибриды, которые обнаруживаются по появлению в данных участках микроматрицы сигналов, например в виде микроскопической флуоресцирующей точки или по тушению флуоресценции исходно меченых последовательностей (Charles et al., 2000).
Для нанесения нуклеиновых кислот на поверхность подложки в основном используют три подхода: короткие олигонуклеотиды синтезируют прямо на ее поверхности, либо прикрепляют к ней предварительно полученные фрагменты ДНК ковалентными или нековалентными связями (Fodor et al., 1991; Lipshutz et al., 1999).
Во время синтеза олигонуклеотидов непосредственно на поверхности стекла применяются те же реагенты и осуществляются те же стадии, что и

Название работы	Автор	Дата защиты
Исследование динамики полимеризации прионных белков дрожжей in vivo методом полуденатурирующего электрофореза	Александров, Илья Михайлович	2006
Получение пептида-мимотопа химических канцерогенов группы полициклических ароматических углеводородов	Апалько, Светлана Вячеславовна	2009
Изменение аллостерической регуляции N-ацетилглутамат синтетазы и карбамоилфосфат синтетазы Escherichia coli методом комбинаторного мутагенеза	Котлярова, Вероника Александровна	2006

Электронная библиотека диссертаций

Гены-мишени фармакологического действия бромпроизводного 2-аминоадамантана-ладастена в клетках головного мозга крыс