Роль факторов, определяющих результативность получения клонированных эмбрионов крупного рогатого скота in vitro

• Автор: Овчинников, Александр Александрович
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: п. Дубровицы
• Количество страниц: 130 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. История клонирования
1.2. Этапы клонирования и факторы, влияющие на их
эффективность
1.2.1. Подготовка цитопластов
1.2.2. Подготовка кариопласта
1.2.2.1. Типы соматических клеток, используемые для получения
клонированных эмбрионов крупного рогатого скота
1.2.2.2. Способы синхронизации соматических клеток
1.3. Реконструирование ооцитов
1.4. Слияние кариопласта с цитопластом
1.5. Активация цитогибридов и постактивационное культивирование
1.6. Метилирование в клонированных формах
1.7. Заключение по обзору литературы
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1.1. Объект исследований
2.1.2. Реактивы
2.1.3. Оборудование
2.1.4. Культуральная посуда
2.1.5. Специальные среды и растворы
2.2. Методы исследований
2.2.1. Транспортировка яичников, выделение и созревание ооцитов
коров
2.2.2. Выделение, культивирование и хранение эмбриональных
фибробластов крупного рогатого скота
2.2.3. Получение цитопласта (энуклеация ооцита) и комплекса
цитопласт/кариопласт (пересадка соматической клетки)

2.2.8. 3.

3.6. 4.
Слияние кариопласта и цитопласта
Активация цитопластов и постактивационное культивирование
Цитологический анализ эмбрионов
Гистохимический анализ культуры соматических клеток
Статистическая обработка результатов экспериментов
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Моделирование условий культивирования бычьих эмбриональных фибробластов с целью синхронизации клеточного цикла на стадии
G0/G1
Влияние различных факторов на эффективность «слепой энуклеации» ооцитов коров созревших in vitro
Влияние пролактина на эффективность «слепой энуклеации» ооцитов коров в зависимости от расположения первого направительного тельца относительно хромосом на стадии
метафазы второго деления мейоза
Влияние продолжительности созревания и пролактина на выделение первого полярного тельца в ооцитах коров in vitro
Влияние продолжительности созревания и пролактина на миграцию направительного тельца относительно хромосом на стадии
метафазы II
Влияние цитохалазина Б на эффективность реконструирования
ооцитов коров методом переноса ядер соматических клеток
Определение параметров слияния цитопласта и кариопласта
Развитие бычьих клонированных эмбрионов в зависимости от
силы, продолжительности и количества электроимпульса
Влияние пролактина на получение клонированных
и партеногенетических эмбрионов крупного рогатого скота
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Таблица 1.
Состав растворов, используемых при работе с эмбриональными фибробластами коров
Компоненты Количество, мг
ФСБ-Г ФСБ-2(без Са2+и Mg2+)* Трипсин/ЭДТ А"
NaCl 8000 10000 7000
KCL 200 250
КН2Р04 200 250
Na2HP04 1150 1440 -
Na2HP04x 12Н20
СаС12 х6Н20 100 - -
MgCl2x 100 - -
Д-глюкоза - - 1000
Трис - - 3000
Трипсин - - 2500
ЭДТА
Феноловый красный 1мкг
*рН 7.2; **рН 7
2.2. Методы исследований
2.2.1. Транспортировка яичников, выделение и созревание ооцитов
коров
Яичники крупного рогатого скота доставляли с мясокомбината в термосе с физиологическим раствором при температуре 30-3 5 °С в течение 3-