Закономерности кариотипической изменчивости в клеточных культурах при длительном культивировании в разных условиях

• Автор: Полянская, Галина Георгиевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 299 с. : ил.

Оглавление.
1. Введение
2. Обзор литературы
2.1. Цитогенетические процессы в клеточных популяциях in vivo
2.1.1.Системный контроль цитогенетических процессов в клеточных популяциях in vivo
2.1.2. Влияние экзогенных и эндогенных факторов на кариотипическую изменчивость в клеточных популяциях
in vivo
2.2. Кариотипическая изменчивость в клеточных популяциях
in vitro
2.2.1. Некоторые генетические и цитогенетические характеристики неиммортализованных клеточных культур
и их изменения в процессе иммортализации
2.2.2. Кариотипическая структура иммортализованных клеточных линий
2.2.3. Некоторые закономерности кариотипической изменчивости, определяющие процесс стабилизации
в клеточных популяциях in vitro
2.2.4.0собенности кариотипической изменчивости в стабильных «маркерных» клеточных линиях при
культивировании в разных условиях
2.2.5.Особенности кариотипической изменчивости в стабильных «безмаркерных» клеточных линиях
при культивировании в разных условиях
2.2.6. Цели и задачи представляемой работы
3. Материалы и методы
3.1. Материалы
3.2. Методы
3.2.1. Культивирование клеток
3.2.2 Получение клеточных гибридов
3.2.3. Кариологический анализ

3.2.4. Используемые в работе воздействия (факторы), изменяющие условия культивирования и способствующие кариотипической нестабильности
3.2.5. Методы статистического анализа
4. Результаты и обсуждение
4.1. Влияние факторов, как правило присутствующих при длительном культивировании, на структурную кариотипическую изменчивость в «безмаркерных» клеточных линиях
4.1.1. Влияние антибиотиков в «терапевтических» дозах на хромосомные аберраций в клеточных линиях фибробластов кожи индийского мунтжака
4.1.2. Влияние криоконсервации на цитогенетические характеристики клеточной сублинии МТ
4.1.3. Влияние сыворотки на хромосомные аберрации
в клеточных линиях М и М,
4.1.4. Исследование кариотипической изменчивости
в процессе длительного культивирования в клеточных
линиях ЫВ1_-3-11 и ЫВ1
4.2. Исследование действия факторов, влияющих на
жизнедеятельность клеток, на хромосомные аберрации в разных клеточных линиях при длительном культивировании
4.2.1. Изменчивость хромосом мунтжака в гибридах соматических клеток
4.2.2. Влияние микоплазменной контаминации клеточной
линии М на хромосомные аберрации
4.2.3. Влияние микоплазменной контаминации клеточных
линий ЫВ1_-3-11 и МВ1_-3-17 на хромосомные аберрации
4.2.4. Влияние микоплазменной контаминации клеточной линии лейомиосаркомы человека ЭК-иТМВ на хромосомные аберрации
4.2.5. Влияние микоплазменной контаминации клеточной линии

легкого эмбриона человека MRC-5 на хромосомные
аберрации
4.2.6. Влияние микоплазменной контаминации клеточных линий с маркерными хромосомами V-79 и М Hela clone
на хромосомные аберрации
4.2.7. Исследование влияния ципрофлоксацина на клеточные линии почки кенгуровой крысы NBL-3-11 и фибробласты
кожи индийского мунтжака М
4.2.8. Влияние внеклеточного белка теплового шока (В-БТШ70)
на хромосомную изменчивость в клетках линии М
4.2.9. Характерные черты дицентриков, возникающих в «безмаркерных» клеточных линиях в процессе культивирования в разных условиях
4.3. Влияние факторов, как правило присутствующих при длительном культивировании, на количественную кариотипическую изменчивость в «безмаркерных» клеточных линиях
4.3.1. Влияние разных культуральных сред на количественную кариотипическую изменчивость в сублинии почки
кенгуровой крысы NBL
4.3.2. Влияние антибиотиков в «терапевтических» дозах на количественную кариотипическую изменчивость
в клеточных линиях М и МТ
4.3.3. Влияние сыворотки на количественную кариотипическую изменчивость клеток М и Mi
4.4. Исследование действия факторов, влияющих на жизнедеятельность клеток, на количественную кариотипическую изменчивость в разных клеточных линиях
при длительном культивировании
4.4.1. Влияние микоплазменной контаминации клеточной линии М на количественную кариотипическую изменчивость
4.4.2. Влияние ципрофлоксацина на количественную карио-

вариантов, в процессе которой происходят определенные структурные и количественные кариотипические изменения. В частности, было показано, что в момент получения клеточной линии NALM-16, из клеток костного мозга больной острым лимфобластным лейкозом, 98.2% клеток имели окологаплоидное число хромосом, 23-27 (Kohno et al., 1980). В результате культивирования линии в течение 15 мес окологаплоидные клоны клеток были постепенно замещены гипердиплоидными, которых стало в популяции 91.2%. По-видимому, околодиплоидные клоны клеток более приспособлены к условиям in vitro. В клеточных линиях, имеющих моносомию по отдельным хромосомам, обнаружены механизмы, компенсирующие это явление. К таким механизмам относятся; полиплоиди-зация, рассмотренная нами выше; амплификация онкогенов (преимущественно myc-онкогенов), которая, по-видимому, способствует генной активации в опухолевых клетках, что позволяет им компенсировать утрату генетического материала; экстракопирование целых аутосом или их фрагментов, что приводит к возрастанию активности локализованных в них ростассоциированных генов, способствующей повышению пролиферативного потенциала таких клеток, тем самым обусловливая их селективное преимущество (Мамаева, 1996, Mamaeva, 1998). Следует обратить внимание, что, несмотря на существенную структурную и количественную перестройку кариотипа в постоянных клеточных линиях, не наблюдаемую в организме, состояние, к которому стремятся клетки в условиях in vitro, сходно с состоянием in vivo. А именно, с одной стороны, нижним пределом кариотипической изменчивости клеток в культуре, как правило, является состояние дисомии подобно состоянию in vivo; наблюдается сохранение хромосомного материала, свойственного донору и сохранение постоянного количества ДНК независимо от количества хромосом. С другой стороны, у разных видов млекопитающих, различающихся по числу хромосом, не обнаружено существенных различий по содержанию ДНК, вычисленного с помощью микроспектрофото-метрии (Оно, 1973). Необходимо обратить внимание, что при прогрессии злокачественных опухолей в организме наблюдается усиление хромосомной нестабильности. В отличие от клеточных линий in vitro в популя-