Особенности диминуции хроматина у Cyclops kolensis и Cyclops strenuus strenuus (Crustacea, Copepoda)

• Автор: Гришанин, Андрей Константинович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1996
• Место защиты: Москва, Борок
• Количество страниц: 119 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.Диминуция хроматина у простейших (Protozoa)

2.Диминуция хроматина у нематод (Nematodes)
3.Диминуция хроматина у копепод (Copepoda)
4.Диминуция хроматина у двукрылых насекомых (Diptera)
5.Диминуция хроматина у позвоночных (Vertebrata)
6. Диминуция хроматина у растений (Plantse)
7.Биологическая роль диминуции хроматина
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1.Феноменологические особенности процесса диминуции хроматина у Cyclops kolensis и Cyclops strenuiis strenuus
2.Содержание ДНК в клетках Cyclops kolensis
и Cyclops strenuus strenuus
3.Структура интерфазных ядер,гранул элиминируемого хроматина и хромосом в процессе диминуции хроматина у Cyclops kolensis
и Cyclops strenuus strenuus
ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Под диминуцией хроматина (ДХ) понимается в широком смысле "круг генетических процессов, приводящих к неравноценности в количественном и качественном отношениям геномов клеток; зародышевой плазмы и соматических тканевых клеток.
Феномен ДХ был открыт Бовери в 1887г. за год до того, как было введено понятие хромосома (Boveri,1887). Результаты, полученные Бовери при изучении ДХ, способствовали в дальнейшем созданию хромосомной теории наследственности (Boveri,1910). Особый интерес представляет ДХ у циклопов (Crustacea,Copepoda),где она заключается в элиминации большей или меньшей части хромосомного материала на ранних стадиях развития из зародышевых соматических клеток. Явление ДХ имеет множество интересных для фундаментальной и прикладной биологии аспектов,начиная от эмбриологии, кончая методологией генной инженерии. Согласно Шапиро (Shapiro,1992),диминуция хроматина относится к тем процессам,которые можно рассматривать в качестве примеров генной инженерии в природе. Наибольшее значение ДХ представляет для понимания организации хромосом высших эукариот, Сам процесс ДХ наглядно показывает, какая часть генома необходима и достаточна для нормального функционирования практически всех тканевых клеток по крайней мере тех организмов,у которых она встречается.
К настоящему времени ДХ известна у немногих видов эукариот (Райков, 1992; Beermann, 1977; Ammemann, 1985;
ТоЫег, 1986; Firnpinelii,Boday,1989; Tobler et al. ,1992) »поэтому особую актуальность приобретают исследования тех объек-

тов,в частности представителен рода Cyclops,у которых ДХ затрагивает значительную,в идеале максимальную долю генома соматических клеток.
Цель и задачи исследования
Целью настоящей работы было изучение процесса ДХ у двух представителей рода Cyclops - Cyclops kolensis Li 11 и подвида Cyclops strenuus strenuus Fischer, отличного по картине ДХ от того,который описала Берман (Beermann,1977). Были поставлены следующие задачи;
1.Провести с помощью цитофотометрии фельгеновокой реакции сравнение содержания ДНК в клетках обоих видов циклопов до и после ДХ,
2.Исследовать цитологически с помощью светового и электронного микроскопа процесс ДХ у C.kolensis.обращая особое внимание на изменение структуры хромосом,
3.Изучить с помощью электронной микроскопии структуру гранул элиминируемого хроматина у C.kolensis,
Научная новизна.
Впервые обнаружен вид эукариот - С,kolensis,у которого после рекордной потери генетического материала - более 90% -в соматических клетках полностью сохраняется число и типичная структура митотических хромосом. Этот факт указывает на то,что у С,kolensis более 90% хромосомной ДНК не связана как с кодирующими,так и с регуляторными функциями необходимыми для дифференцировки соматических клеток.
Обнаружен подвид О,strenuus strenuus диплоидное количество хромосом у которого,а также картина и график димину-
ледующей фиксацией зародышей и окраской ацетоороеином
Для световой микроскопии яйцевые мешки самок циклопов о развивающимися эмбрионами фиксировали смесью этанола и уксусной кислоты (3:1) в течение 3 часов при 4°С с 3-кратной сменой фиксатора. Затем часть фиксированного материала окрашивали 0,2% ацетоороеином ,раздавливали в 45%-ной уксусной кислоте и исследовали в световом микроскопе,Другую часть материала фиксировали в смеси этанола и уксусной кислоты(3:1), вместе с семенниками Drosophila гоеlanogaster(линия Меллер-5). Далее фиксированный материал промывали в 70% этаноле 15 мин,и столько же в 35% этаноле,затем 3 раза, по 10 мин в дистиллированной воде,Проводили гидролиз в IN HCl при t=60°C в течение 12,5 мин, Наличие в одном объеме яйцевых циклопов с яйцевыми мешками и семенников дрозофилы гарантировало одинаковые условия гидролиза для обоих объектов,что исключительно важно при цито-фотометрических исследованиях, По окончании гидролиза пробы промывали в 5 сменах дистиллированной воды в течене 30 мин,и окрашивали реактивом Шиффа на протяжении 2 часов,После этого промывали исследуемый материал свежеприготовленной сернистой водой 3 раза по 10 мин,отмывали дистиллированной водой 3 раза по 10 мин,и помещали последовательно в 35%,70%,96% этанол по 15 мин в каждом,и раздавливали покровным стеклом на предметном, затем снова помещали в 96% этанол на £0 мин,Далее исследуемый материал проводили через бутанол,бутанол-ксилол,ксилол по 20 мин в каждом,и заключали в бальзам, модифицированная нами методика подготовки препаратов для цитофотометрии не требует