Обусловленные эпилепсией изменения ГАМК рецепторов гиппокампа: молекулярно-биологические исследования одиночных нейронов

• Автор: Рихтер, Татьяна Яковлевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 132 с.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. РОЛЬ ГАМКд-РЕЦЕПТОРОВ В ЭПИЛЕПСИИ ТЕМПОРАЛЬНОЙ ЗОНЫ (обзор литературы)
1.1. Строение ГАМКд-рецепторов
1.1.1. Сайты связывания агонистов ГАМ Кд-рецепторов
1.1.2. Сайты связывания бензодиазепинов, барбитуратов, пикротоксина и стероидов
1.1.3. Молекулярная структура субъединиц ГАМ Кд-рецепторов
1.1.4. Хромосомная локализация генов ГАМКд-рецептора
1.1.5. Многообразие комплекса ГАМКд-ионных каналов
1.1.6. Фармакологические свойства субъединиц ГАМКд-рецептора
1.2. Хронические эпилептогенные изменения на клеточном уровне в лимбической системе
1.2.1. Анатомические изменения в лимбической системе при ЭТЗ
1.2.2. Изменения в ГАМКд-рецепторах из гиппокампа животных, больных ЭТЗ
1.2.3. Изменения ГАМКд-рецепторов, очевидные в синаптических реакциях
1.2.4. Изменения в транскрипции субъединиц ГАМКд-рецепторов
1.2.5. Функция ГАМКд-рецепторов в эпилептических ЗФ-нейронах человека: корреляция с моделями животных
1.2.6. Прочие изменения в эпилептическом гиппокампе
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Подготовка экспериментальных животных

2.2. Выделение РНК
2.3. РНК- и слот-блот анализ
2.4. Синтез радиоактивных меток для РНК- и слот-блотов
2.5. Выделение одиночных нейронов
2.6. Электрофизиологические эксперименты: вольтаж-кламп рекординг
2.7. Полимеразно-цепная реакция на одиночных нейронах
2.8. Антисенс-РНК амплификация
2.9. Окрашивание срезов
2.10. Материалы
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 3. СВЯЗАННЫЕ С ЭТЗ ИЗМЕНЕНИЯ В МОЛЕКУЛЯРНОЙ СТРУКТУРЕ ГАМКа-РЕЦЕПТОРОВ в отдельных зонах мозга ЭПИЛЕПТИЧЕСКИХ ЖИВОТНЫХ
3.1. Результаты окрашивания по Тимму гиппокампа контрольных и эпилептических животных
3.2. Анализ изменений в экспрессии мРНК отдельных субъединиц ГАМКд-рецептора на тканевом уровне
3.3. Изменения в экспрессии мРНК субъединиц ГАМКд-рецептора в одиночных нейронах у эпилептических животных
3.3.1. Связанные с ЭТЗ изменения в молекулярной структуре ГАМКд-рецепторов в зоне Fascia Dentata гиппокампа хронически эпилептических животных
3.3.2. Изменения в молекулярной структуре ГАМКд-рецепторов в зоне Fascia Dentata гиппокампа в латентном периоде ЭТЗ
3.3.3. Изменения в экспрессии мРНК декарбоксилаз глутаминовой

кислоты в гранулярных клетках из зубчатой фасции эпилептических
животных
3.3.4. Связанные с эпилепсией изменения в молекулярной структуре
ГАМКд рецепторов в зонах СА1 и САЗ гиппокампа
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

В ранних работах, исследовавших клеточные механизмы, ответственные за лежащее в основе эпилепсии гипервозбужденное состояние, было установлено, что одним из основных способов вызывания эпилептических разрядов в мозге было блокирование торможения (Prince, D.A., 1985). Основываясь на этом факте, одна из первых гипотез в исследовании эпилепсии считала, что главной причиной судорожных заболеваний является снижение торможения в мозге. Это получило название “ГАМК гипотезы” эпилепсии (Meldrum, B.S., 1989; De Deyn, P., et al., 1990; Olsen, R., Avoli, М., 1997). Ученые изучали количество ГАМКэргических интернейронов и ГАМКэргических нервных терминалов внутри и вокруг судорожного фокуса в неокортексе, для того, чтобы определить, приводит ли к растормаживанию и усилению генерации судорожных разрядов селективная уязвимость этих нейронов. Вначале были получены доказательства, что потеря интернейронов в неокортикапьном судорожном фокусе может способствовать эпилептогенезу (Ribak, С.Е., et al., 1982). Однако, в результате изучения хирургически удаленной ткани из мозга больных ЭТЗ и из исследований на экспериментальных моделях ЭТЗ стало очевидно, что в целом ГАМКэргические интернейроны были селективно сохранены в этих эпилептических тканях по сравнению с принципиальными глутаматэргическими нейронами (Sloviter, R.S., 1987; Franck, J.E., et al., 1988; Babb, T.L., et al., 1989). С помощью более детального изучения субпопуляций ГАМКэргических интернейронов в эпилептической лимбической системе были накоплены доказательства, что определенные субпопуляции интернейронов, особенно в зоне СА4, были селективно уязвимы и утрачены в эпилептической ткани (Sloviter, R.S., 1987; Гопаие, A., et al., 1993; Houser, C.R., Esclapez, М., 1996;). Это позволило