Агглютинины Rhizobium Leguminosarum 252 и их роль во взаимодействии с растениями

• Автор: Соболева, Елена Федоровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 119 с. : ил.

Содержание
Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Понятие "агглютинины (лектины)"
1.2. Бактериальные агглютинины
1.3. Основные представления об углевод-белковом взаимодействии бактерий с растениями
1.3.1. Участие лектинов растений в углевод-белковом
взаимодействии бактерий с растениями
1.3.2. Роль агглютининов бактерий во взаимодействии бактерий с растениями
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследований, условия культивирования
2.1.1. Среды, используемые для культивирования микроорганизмов
2.2. Методы
2.2.1. Выделение и очистка агглютининов ризобий
2.2.2. Определение гемагглютинирующей активности
2.2.3. Определение молекулярной массы белков
2.2.4. Определение аминокислотного состава белков
2.2.5. Определение углеводного состава
2.2.6. Определение углеводной специфичности агглютининов
2.2.7. Определение адсорбции клеток ризобий на эритро-

цитах крови человека
2.2.8. Определение адсорбции клеток ризобий на корнях
проростков гороха
2.2.9. Выделение фракций корней проростков гороха
2.2.10. Метод интерфазных колец преципитации в геле
2.2.11. Получение антител к агглютининам ризобий
2.2.12. Метод иммунодота
2.2.13. Метод электроблотинга
2.2.14. Получение мутанта, дефектного по гемагглютиниру-ющей активности
2.2.15. Определение активности ферментов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Физико-химические свойства агглютининов Р. 1е&и-
топоБагит
3.2. Характеристика мутантных клеток /?. итпоБагит 252/7, дефектных по гемагглютинирующей активности
3.3. Изучение роли агглютининов Р. 1ерит1ПОБагит
в адгезии к корням проростков гороха
3.4. Взаимодействие агглютининов ризобий с фракциями
корней гороха
3.5. Взаимодействие агглютининов ризобий с лектином
корней гороха, пшеницы
3.6. Изучение влияния агглютининов Р. 1ед'ит1поБагит 252 на активность гидролитических ферментов растительной клетки
3.7. Изучение влияния агглютининов Р. 1ериттоБагит

252 на активность дегидрогеназ растительной клетки
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Затем эритроциты отмывали от трипсина (3-5 раз) центрифугированием в десятикратном объеме ФСБ (131).
Титр гемагглютинирующей активности выражали как наибольшее разведение раствора белка, вызывающее агглютинацию.
Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) содержал: NaCl - 8,5 г;
Na2HP04‘2H2Û - 1,34 г; NaH2P04*2H2Û - 0,39 г на 1 л дистиллированной воды, pH=7,2.
2.2.3. Определение молекулярной массы белков
Молекулярные массы белков определяли с помощью диск-электрофореза в 10% полиакриламидном геле (ПААТ) с додецилсульфатом натрия (SDS) (132), используя для этой цели белки-маркеры фирмы Ser-va и LKB: фосфорилазу (92,5 kDa), бычий сывороточный альбумин
(BSA)(67 kDa), овальбумин (43 kDa), карбоангидразу (29 kDa), лак-тальбумин (14,4 kDa).
Белки окрашивали 0,2% раствором Кумасси Q-250 (133) или 0,1% раствором серебра (134); углеводы - с применением реактива Шиффа (133), а также по реакции фенола с серной кислотой (135).
2.2.4. Определение аминокислотного состава белков
Аминокислотный состав белков определяли на аминокислотном анализаторе ААА-339 (ЧССР). Подготовку образца проводили по общепринятому методу при 105°С 24 ч в бн НС1 (136).