Регуляция протеолиза продуктов митохондриальной трансляции в дрожжах

• Автор: Новикова, Людмила Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 162 c. : ил

Принятые сокращения
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава I. Продукты митохондриальной трансляции
1.1. Состав митохондриально синтезируемых полипептидов
1.2. Свойства митохондриально синтезируемых полипептидов
Глава 2. Протеолиз продуктов митохондриальной трансляции
Глава 3. Митохондриальные протеиназы
3.1. Индивидуальные митохондриальные протеиназы
3.2. Участие митохондриальных протеиназ в регуляции обмена продуктов митохондриальной трансляции
3.3. Отношение митохондриальных протеиназ к протео-литическощу процессингу предшественников МИТО-. хондриальных белков
Постановка задачи
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Материалы и методы исследования
Результаты эксперимента
Глава I. Влияние глюкозной репрессии на деградацию продуктов митохондриальной трансляции в дрожжах
1.1. Клеточное дыхание дрожжей
1.2. Изменение содержания белка в условиях глюкозной репрессии
1.3. Содержание цитохромов в интактных клетках
1.4. Изменение активностей протеиназ А и В при
глюкозной репрессии дрожжей

1.5. Включение Н-лейцина в продукты митохондриальной трансляции в условиях глюкозной репрессии

1.6. Содержание Н-лейцина в продуктах митохондриальной трансляции СМЧ, выделенных в присутствии ингибиторов протеиназ
1.7. Влияние глюкозной репрессии на протеолиз продуктов митохондриальной трансляции in Ыьо
1.8. Влияние глюкозной репрессии на протеолиз продуктов митохондриальной трансляции в изолированных митохондриях
Глава 2. Митохондриальные протеиназы дрожжей: электрофоретическое выявление, субстратная специфичность и чувствительность к ингибиторам
2.1. Определение в ПААТ БАНА-, БАЛА- и цитохром.с-гид-ролазных активностей белков СМЧ

2.2. Протеолитическая активность СМЧ с Н-цитохромом
с в качестве субстрата
2.3. Протеолитическая активность СМЧ с азоколлом, гемоглобином, казеином и цитохромом с в качестве субстратов
2.4. Протеолитическая активность СМЧ с использованием синтетических субстратов сериновых протеиназ
2.5. Изменение гидролизных активностей СМЧ после процедуры замораживания-оттаивания
2.6. Чувствительность гидролизных активностей СМЧ к ингибиторам протеиназ
Глава 3. Регуляция скорости протеолиза продуктов митохондриальной трансляции в дрожжах
3.1. Изменение протеолитической активности внутренней митохондриальной мембраны в условиях глюкозной

репрессии
3.2. Влияние глюкозной репрессии на состав продуктов митохондриальной трансляции
3.3. Изменение физического состояния внутренней митохондриальной мембраны при глюкозной репрессии
Глава 4. Универсальность корреляции между скоростью деградации продуктов митохондриальной трансляции и параметрами, характеризующими физическое состояние внутренней митохондриальной мембраны . . . 114 ОБСУВДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Глава I. Факторы, определяющие эффективность элиминации продуктов митохондриальной трансляции в дрожжах
Глава 2. Некоторые аспекты контроля за сборкой митохондрий
Заключение
вывода
ЛИТЕРАТУРА

12. Определение активностей протеиназ А и В
Дрожи выращивали до ранней стационарной фазы роста как опиоано выше, после чего дрожжевая суспензия была разделена на две порции, в одной из которых концентрация клеток оставалась исходной (0,5$ по весу), а в другой была повышена до 5$ по весу. Первая из них в дальнейшем будет называться несгущенной суспензией, а вторая - сгущенной суспензией. Клеточные суспензии инкубировали параллельно при 35° в присутствии, либо в отсутствие 10$ глюкозы. По ходу инкубации отбирали аликвоты суспензии, клетки осаждали центрифугированием, прошвали дистиллированной водой и суспендировали в 30 мМ ацетатном буфере (pH 5,0) в отношении 1:2 (по весу).
Для получения гомогената дрожжи разрушали с помощью Х-прес-са, "ЪКВ" (Швеция) при давлении 2000 кг/см2 и температуре - 20°. Эту операцию повторяли дважды, добиваясь при этом 100$-го разрушения клеток. Для определения полноты разрушения проводили микроскопический контроль.
Для активации протеиназ гомогенаты инкубировали в указанном ацетатном буфере при температуре 23°. В этих условиях активности протеиназ монотонно возрастали, достигая максимальных уровней после 72 час инкубации. Эти максимальные активности, по всей видимости, отражали реальные общие активности протеиназ А и В в клетке. Активности протеиназ, определенные до начала инкубации клеточных гомогенатов, называются в тексте "свободными”, а активности, определенные после 72 час инкубации - "общими". Для предотвращения бактериального заражения в инкубационную среду добавляли антибиотики: стрептомицинсульфат (50 мг/мл), пенициллин б (40000 ед/мл) и нистатин (10000 ед/мл).