Новые аспекты локализации и регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе и висцеральных органах крысы

• Автор: Цибезов, Валерий Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 c. : ил

СОДЕРЖАШЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Функции гипофизотропных гормонов гипоталамуса
2. Гипоталамическая регуляция репродуктивной
функции
2.1. Роль гипоталамуса и лголиберина в гипотала-мо-гипофизарной системе
2.2. Локализация люлиберина в гипоталамусе
2.3. Регуляция содержания и секреции люлиберина
в гипоталамусе
2.3.1. Участие половых стероидных гормонов и ЛГ в регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе
2.3.2. Катехоламины и ацетилхолин в регуляции содержания люлиберина в гипоталамусе
2.3.3. Оштоидные пептиды в ги по тал агло-гипофиз арнои системе
2.4. Биосштез и деградация люлиберина в гипоталамусе
3. Внегипоталамическая локализация и экстрагипо-таламические функции гипоталамических гормонов
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
I. Радиоиммунологический метод определения люлиберина
1.1. Получение антисыворотки к люлиберину
1.2. Получение [-^т] люлиберина
1.3. Определение удельной радиоактивности
[~251 ] люлиберина
1.4. Определение рабочего разведения антисыворотки
1.5. Анализ люлиберина в гипоталамусе
1.6. Анализ люлиберина в висцеральных органах
2. Получение биологического материала для определения люлиберина в гипоталамусе
2.1. Животные
2.2. Получение фрагментов гипоталамуса
2.3. Контроль интактности аркуатных ядер
во фрагментах гипоталамуса
2.4. Экстракция люлиберина из фрагментов гипоталамуса для радиоиммунологического анализа
3. Определение иммунореактивного люлиберина в висцеральных органах
3.1. Получение экстрактов висцеральных органов
и подготовка образцов к анализу
3.2. Хроматография экстрактов висцеральных
органов
4. Ферментативная инактивация люлиберина в висцеральных органах
4.1. Получение гомогенатов ткани для определения пептидазной активности
4.2. Методы определения пептидазной активности
4.3. Определение ингибирования деградации
[12о1 ] люлиберина факторами пептидной природы
4.4. Определение оптимума pH ферментативной деградации люлиберина

4.5. Определение активности пептидазы сердца
в зависимости от ионного состава среды
4.6. Условия хроматографии и диализа
гомогената сердца
4.7. Определение ингибирующего эффекта лшиберина на деградацию люлиберина в присутст-

вии ионов Са
4.8. Определение влияния ингибиторов протеаз на активность люлиберин-разрушающего фермента сердца
4.9. Определение молекулярной массы люлиберин-разрушающего ферлента из сердца
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Литерализация люлиберина в гипоталамусе
2. Люлиберин в висцеральных органах крысы
3. Ферментативная инактивация люлиберина в висцеральных органах крысы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

таким же ошибкам ведет повреждение аркуатных ядер при удалении срединного возвышения. В связи с этим, необходима точная оценка качества получаемых гипоталамических фрагментов. Полноту удаления срединного возвышения и интактность аркуатных ядер контролировали микроскопически. Критерием интактности аркуатных ядер считали сохранность эндотелия третьего желудочка и мягких мозговых оболочек. При исследовании срезов 36 гипоталамусов были выявлены следующие дефекты: а) в 3 случаях (8$) видны незначительные остатки срединного возвышения; б) в 7 с: у чаях (19%) обнаружили повреждение аркуатных ядер, не превышающие 26%, а в среднем составляющие 5-4% каждого аркуатного ядра по площади; в) в 5 случаях (13%) зарегистрированы незначительные повреждения вне аркуатных ЯП ер. Таким образом, дефекты, которые могут исказить результаты, в сумме не превышают 27$. На рис.4 представлены микрофотографии фронтальных срезов интактного гипоталамуса (А) и гипоталамуса, лишенного срединного возвышения (Б). Из рисунка следует, что предлагавши метод позволяет полностью удалять срединное возвышение при сохранении интактности аркуатных ядер.
2.4. Экстракция люлиберина из фрагментов гипоталамуса для РИА
Фрагменты гипоталамуса гомогенизировали в 0.6 мл 2М уксусной кислоты, центрифугировали 10 мин при 5000 ^ , отбирали 0.3 мл супернатанта, и лиошилизовали. К полученному материалу добавляли 2 мл РИА-буфера, перемешивали, центрифугировали 10 мин при 5000^ и отбирали на анализ 100 мкл супернатанта.
3. Определение иммунореактивного люлиберина в висцеральных органах
3.1. Получение экстрактов висцеральных органов и подготовка образцов к анализу