Механизмы торможения димефосфоном процессов активации тромбоцитов

• Автор: Минуллина, Изида Ренатовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ:

Список сокращений
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Механизмы активации и ингибирования
тромбоцитов
1.1. Механизмы активации тромбоцитов
1.1.1. Адгезия тромбоцитов. Рецепторный аппарат, опосредующий процесс адгезии
1.1.2. Агрегация тромбоцитов. Рецепторный аппарат,
опосредующй агрегацию
1.1.3. Система вторичных посредников в активации тромбоцитов
1.1.3.1. Активация фосфолипазы С
1.1.3.2. Система инозитолфосфатов
1.1.3.3. Обмен внутриклеточного кальция
1.1.3.4. Система диацилглицерин - протеинкиназа С
1.1.3.5. Активация тромбоцитарной фосфолипазы А2
1.2. Механизмы ингибирования тромбоцитов
1.2.1. Регуляция метаболизма и роль цАМФ
1.2.2. Регуляция метаболизма и роль цГМФ
Глава 2. Материалы и методы исследования
Глава 3. Антиагрегационный эффект димефосфона в системе сильных и
слабых агонистов
3.1. Выраженность антиагрегационного эффекта димефосфона при использовании АДФ и адреналина в качестве активаторов тромбоцитов
3.2. Влияние димефосфона на звено аденилатциклаза - цАМФ
3.2.1. Активность аденилатциклазной системы и влияние на нее

димефосфона, определяемые в функциональных тестах
3.2.2. Прямое определение внутриклеточного содержания цАМФ и
влияние на него димефосфона
3.3. Влияние димефосфона на путь активации арахидоновая кислота
- тромбоксан А2
3.4. Влияние димефосфона на метаболизм фосфоинозитолов
Глава 4. Кальцийзависимые процессы клеточной активации как основное
звено реализации антиагрегационного эффекта димефосфона
4.1. Эффект димефосфона на агрегацию тромбоцитов, индуцированную кальциевым ионофором А23187
4.2. Сравнительная активность димефосфона и кальциевого хелатора БАФТА-АМ по отношению к агрегации тромбоцитов
4.3. Изучение влияния димефосфона на базальный и АДФ-стимулированный уровень кальция в тромбоцитах
Глава 5. Антиагрегационный потенциал димефосфона в условиях
взаимодействия с эндотелием
5.1. Факторы, обусловливающие антиагрегационную активность сосудистой стенки
5.2. Влияние димефосфона на выраженность антиагрегационного действия эндотелиальных факторов
Глава 6. Обсуждение результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Приложение

Список сокращений, использованных в диссертации:
АДФ - аденозиндифосфат АК - арахидоновая кислота АСК - ацетилсалициловая кислота
БАФТА-АМ - 1,2 бис(2-аминофенокси)-зтаи-П,КіТ,К'-тетраацетатной кислоты ацетоксиметильный эфир БТП - богатая тромбоцитами плазма ГП - гликопротеин ДАТ - диацилглицерин Дф - димефосфон Кд - константа диссоциации ОТП - обедненная тромбоцитами плазма ПК С - протеинкиназа С РОК - рецептороперируемые каналы ФАТ - фактор активации тромбоцитов ФВ - фактор Виллебранда ФДЭ - фосфодиэстераза цАМФ - циклический аденозинмонофосфат цГМФ - циклический гуанозинмонофосфат ЭДзо - 50-процентная эффективная доза
[Са2+]| - внутриклеточная концентрация свободных ионов кальция 1Р3 - инозитолтрисфосфат Рв - простагландин

ском счетчике и концентрация их доводилась до 200 тыс/мкл. До анализа суспензия тромбоцитов сохранялась в бескальциевой среде при +10°С. Перед воспроизведением агрегации в каждую пробу вносили фибриноген человека (Bio-Mark; фибриноген для коагулологических определений, содержание коагулирующего белка - 98%) в конечной концентрации 0.2 мг/мл и хлорид кальция в конечной концентрации 2 мМ. Стандартная калибровка для суспензии тромбоцитов проводилась против буфера Т3. В качестве индукторов агрегации использовались кальциевый ионофор А23187 (Sigma) в конечной концентрации 0.1, 0.2, 0.5 и 1 мкМ в 1 мл DMSO и тромбин (Bio-Mark) в концентрациях 0.5 и 1 ед. NIH/мл в 10 мкл 0.9 % NaCl (в этом случае фибриноген не добавляли).
Использовавшаяся в качестве препарата сравнения ацетилсалициловая кислота поступала в реакционную суспензию в конечной концентрации 500 мкМ в 1 мкл спиртового раствора; в контрольную пробу вводилось равное количество спирта. Фосфаден вносили в виде раствора с конечной концентрацией 500 мкМ. Внутриклеточный хелатор ионов кальция - БАФТА-АМ (Sigma) добавляли в БТП либо в суспензию тромбоцитов в виде раствора в 1 мкл DMSO в концентрациях 1,10, 25, 50, 100 мкМ. В контроль вносилось равное количество DMSO.
Величина ЭД50, или 50-процентная эффективная доза - концентрация вещества, вызывающая 50% ингибирование агрегационной активности тромбоцитов - определялась по методу Рида и Менча.
Определение содержания циклического аденозинмонофосфата
Содержание циклического аденозинмонофосфата в тромбоцитах определяли радиоиммунологическим методом с помощью набора реагентов «Радиохим» Российского научного центра «Прикладная химия». В основе метода лежит конкурентное связывание циклического АМФ, содержащегося в образце, и меченого 3Н-цАМФ, вводимого в аналитическую систему, с белком, представляющим собой регуляторную субъединицу цАМФ-зависимой проте-