Получение и изучение биологической активности конъюгатов эпидермального фактора роста с противоопухолевыми химиотерапевтическими препаратами

• Автор: Гуманов, Сергей Георгиевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11. Эпидермальный фактор роста
1.1.1. Структура и физико-химические свойства ЭФР
1.1.2. Видоспецифичность ЭФР
1.1.3. Предшественники ЭФР и ЭФР-связывающий белок
1.1.4. Ген ЭФР
1.1.5. Получение ЭФР
1.1.6. Структура и функции рецептора ЭФР
1.1.7. Механизмы митогенного действия ЭФР
1.1.8. Процессинг ЭФР-рецепторных комплексов
Г 1.9. Распределение рецепторов ЭФР в организме
1.1.10. Получение химических производных ЭФР
1.1.11. Перспективы использования ЭФР в качестве вектора для адресного 28 транспорта противоопухолевых препаратов
1.2. Противоопухолевые препараты
1.2.1. Антибиотики антрациклинового ряда
1.2.2. Использование конъюгатов антрациклинов для направленной 39 терапии опухолей
1.2.3. Винкаалкалоиды
1.2.4. Конъюгаты с винкаалкалоидами
1.2.5. Фталоцианины как агенты для фотодинамической и темновой 46 (каталитической) терапии
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Выделение и очистка ЭФР
2.2. Получение конъюгатов
2.2.1. Конъюгаты ФЦ(А1), ФЦ(Со) и Вк с ЭФР
2.2.2. Конъюгаты Др, Км и Вб с ЭФР
2.3. Культивирование клеток
2.4. Определение цитотоксической активности препаратов in vitro
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Вб - винбластин Вк - винкристин Др - доксорубицин Км - карминомицин
МЛУ - множественная лекарственная устойчивость ТФ(Со) - окта-4, 5-карбоксифталоцианин (терафтал) ФЦ(А1) - фталоцианин алюминий дисульфохлорид ФЦ(Со) - фталоцианин кобальт дисульфохлорид ЦТА - цитотоксическая активность ЭФР - эпидермальный фактор роста

2.4.1. Фталоцианины и их конъюгаты с ЭФР
2.4.2. Антрациклиновые антибиотики, растительные алкалоиды и их 58 конъюгаты с ЭФР
2.4.3. Оценка жизнеспособности клеток
2.5. Исследование накопления и внутриклеточного распределения 59 антрацикликовых антибиотиков и их конъюгатов с ЭФР
2.6. Определение противоопухолевой активности препаратов in vivo
2.7. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Цитотоксическая активность конъюгатов ЭФР с ФЦ(А1), ФЦ(Со) и 62 ТФ(Со)
3.2. Противоопухолевая активность конъюгата ЭФР с ТФ(Со) in vivo
3.3. Цитотоксическая активность конъюгатов ЭФР с винкаалкалоидами
3.4. Противоопухолевая активность конъюгата ЭФР с Вб in vivo
3.5. Цитотоксическая активность конъюгата ЭФР-Др
3.6. Противоопухолевая активность конъюгата ЭФР с Др in vivo
3.7. Цитотоксическая активность конъюгата ЭФР-Км
3.8. Противоопухолевая активность конъюгата ЭФР с Км in vivo
3.9. Сравнительный анализ ЦТА конъюгатов ЭФР с фталоцианинами, 72 винкаалкалоидами и антрациклинами в отношении опухолевых клеток исследованных линий
3.10. Сравнительное исследование ЦТА, динамики накопления и 74 внутриклеточного распределения антрациклиновых антибиотиков и их конъюгатов с ЭФР
3.10.1. ЦТ А антрациклинов и их конъюгатов с ЭФР
3.10.2. Накопление свободных и связанных с ЭФР антрациклинов в 75 чувствительных и резистентных опухолевых клетках
3.10.3. Накопление свободных и связанных с ЭФР антрациклинов в ядрах 77 чувствительных и резистентных опухолевых клеток
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
топоизомеразой II, актив изованной т-АМБА (интеркалирующим акридином), были обратимы и легко восстанавливались после удаления антибиотика. В отличие от этого, число разрывов в клеточной ДНК, индуцированных различными антрациклипами, не уменьшалось и даже нарастало после удаления лекарства [Кобз У.Е. е1 а!., 1979; 7дуеШг Ь.А. е! а!., 1981; Саргашсо О. е! а!., 1987, 1989]. Однако при высоких концентрациях антрациклинов наблюдается полное блокирование процесса образования разрывов в ДНК, опосредованного топоизомеразой II. Таким образом, отмечается двойной эффект воздействия антрациклинов на топоизомеразу II: стимулирующий и ингибирующий. Более того, Др индуцирует расщепление нуклеотидных последовательностей (например, в БУ40 ДНК), которые в норме ферментом вообще не расщепляются. Примечательно, что после удаления Др из среды инкубации процесс образования разрывов ДНК продолжается, что может быть результатом экранирования Др сайтов специфических ингибиторов фермента.
Предположение о первичном взаимодействии Др с топоизомеразой II объясняет отсутствие корреляции активности антрациклина с прочностью связывания. Согласно этому механизму, интеркаляция антибиотика хотя и предполагается, но не является необходимой для активации топоизомеразы II. Более того, прочность связывания антибиотика с ДНК более коррелирует с супрессией, чем с активацией фермента [Саргашсо в. е! а1., 1990]. Возможно, что специфическое взаимодействие антрациклин-ДНК-фермент играет более важную роль, чем сила связывания антибиотика с ДНК.
Таблица 2. Сравнительная зависимость продукции разрывов ДНК и силы связывания антибиотика.
Производное ДНК связ. Кд, М'1 Относительное расщепление ДНК
целые клетки изолированная ДНК
Доксорубицин 4,8x106 1,00 1
4’ері доксорубицин 2,2x106 нет данных 1
9-Деоксидоксорубицин 1,6x10" 0,50 нет данных
Даунорубицин 4,8x106 нет данных 2
11-дезоксидаунорубицин 5,7x10' 1,14 0
Доксорубицин-р-аномер 1,5 х 104 нет данных 0