Свойства и регуляция активности аконитатгидратазы и НАДФ-изоцитратдегидрогеназы в условиях интенсификации свободнорадикального окисления в печени крыс при токсическом гепатите

• Автор: Андреещева, Екатерина Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 273 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л Токсическое поражение печени, патогенез и клиническая картина
1Л Л Общая характеристика гепатитов
1ЛЛЛ Токсические гепатиты и вызывающие их факторы
1ЛЛ.2. Морфологическая картина печени при ее токсических поражениях
1ЛЛ.З. Патобиохимия изменений печени при токсических гепатитах
1ЛЛ.4. Создание модели токсического гепатита при помощи ССЦ20 1Л .2. Защита печени от ксенобиотиков
1Л .3. Биохимические аспекты влияния ацетилсалициловой кислоты
1.2.Свободнорадикальное окисление
1.2Л. Роль свободнорадикального окисления в развитии патологических состояний
1.2.2. Пероксидное окисление липидов
1.2.3. Механизмы образования активных форм кислорода
1.2.4. Роль и функции активных форм кислорода
1.2.5.Системы защиты организма от действия активных форм кислорода
1.2.5.1 .Ферментативные антиоксидантные системы
1.2.5.2. Неферментативные антиоксидантные системы
1.3. Функционирование аконитатгидратазы
1.3.1. Распространение и функции аконитатгидратазы
1.3.1.1. Катализируемая реакция

1.3.1.2. Распространение аконитатгидратазы и ее участие в метаболических процессах
1.3.2. Изоформы и внутриклеточная локализация аконитатгидратазы
1.3.3. Очистка и структура аконитатгидратазы 5
1.3.3.1. Очистка и стабильность аконитатгидратазы из различных источников
1.3.3.2. Молекулярная масса и структура аконитатгидратазы
1.3.4. Кинетическое поведение и регуляция активности аконитатгидратазы
1.3.4.1. Зависимость активности аконитатгидратазы от концентрации субстратов, pH и температуры
1.3.4.2. Регуляция активности аконитатгидратазы
1.3.4.2.1. Активаторы
1.3.4.2.2. Ингибиторы
1.4. Распространение и функции изоцитратдегидрогеназы
1.4.1. Катализируемая реакция
1.4.2. Участие изоцитратдегидрогеназы в метаболических процессах
1.4.3. Распространение и внутриклеточная локализация НАДФ — изоцитратдегидрогеназы
1.4.4. Очистка и структура НАДФ - зависимой изоцитратдегидрогеназы
1.4.4.1. Очистка
1.4.4.2. Молекулярная масса и структура НАДФ-изоцитратдегидрогеназы
1.4.5. Кинетические параметры и регуляция активности
НАДФ - изоцитратдегидрогеназы
1.4.5.1. Зависимость активности изоцитратдегидрогеназы от концентрации субстрата и коферментов

1.4.5.2. Влияние температуры и pH на скорость ферментативной реакции, катализируемой НАДФ-изоцитратдегидрогеназой
1.4.6. Регуляция активности НАДФ - зависимой изоцитратдегидрогеназы
1.4.6.1. Активаторы
1.4.6.2. Ингибиторы
1.4.7. Механизмы регуляции активности НАДФ -изоцитратдегидрогеназы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1 .Получение сыворотки крови и тканевого гомогената
2.2.2. Создание модели экспериментального токсического гепатита у крыс
2.2.3. Введение ацетилсалициловой кислоты
2.2.4. Оценка оксидативного статуса
2.2.4.1. Определение содержания диеновых конъюгатов
2.2.4.2. Определение содержания малонового диальдегида
2.2.4.3 Определение интенсивности биохемилюминесценции
2.2.5. Определение содержания железа
2.2.6. Определение содержания кальция
2.2.7. Определение активности ферментов
2.2.8. Выделение клеточных органелл
2.2.9. Определение содержания белка
2.2.10. Выделение и очистка ферментов
2.2.10.1. Фракционирование белков при помощи сульфата аммония
2.2.10.2. Гель-фильтрация
2.2.10.3. Ионообменная хроматография

(Мерзляк, 1999). Роль АФК в защите организма включает не только фагоцитоз опасных клеток, но и запуск других воспалительных и иммунных процессов (Скулачев, 1999; Норман, 2001). Необходимо отметить, что мнение о положительном действии АФК в организме в настоящее время уже не является чем-то парадоксальным. Благоприятное действие низких концентраций токсических веществ является давно установленной биологической закономерностью. Показано, что микромолярные концентрации Н2Ог не разрушают геном, а активируют экспрессию антиоксидантаых ферментов (Кондрашова, 1999). Патологические последствия возникают при оксидативном стрессе, а факторы и вещества, способствующие этому, называют прооксидантами, эти термины спорны, но общеприняты. (Кулинский, 1990).
ОН* способен быстро и необратимо окислять практически любое из веществ биологического происхождения, выводя тем самым это вещество из строя (Скулачев, 1998). Из АФК только ОН* вызывает повреждение ДНК (окисление оснований, их модификации, разрыва цепей, повреждение хромосом), при этом, как считают в настоящее время, АФК вызывают больше мутаций, чем другой класс мутагенов - алкилирующие вещества. Высокие концентрации АФК и липидных гидропероксидов ингибируют синтез ДНК и деление клеток и могут активировать апоптоз (программированную смерть клеток), что полезно для организма, так как ценой гибели части клеток предупреждается прогрессирование злокачественных процессов и гибель целого организма (Кулинский, 1999). АФК атакуют молекулу ДНК, вызывая разрывы цепи и модификацию углеводной части и азотистых оснований, что может привести к появлению точечных мутаций (НаШше1, 1989; Васильева, 1996). Недавно проанализированы эффекты АФК, направленные на геном и приводящие к экспрессии клеточных белков, предполагается, что система клеточных антиоксидантов регулирует эффективность метаболизма, управляя синтезом клеточных белков (Болдырев, 2000). АФК стимулируют дифференцировку ДНК, причем ей предшествует остановка деления. Полагают, что такое воздействие связано с укорочением теломерной ДНК. Но известно