Роль апоптоза в патогенезе заболеваний печени различной этиологии

• Автор: Дмитриева, Елена Владиславовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Характеристика апоптоза
1.2. Характеристика хронических вирусных гепатитов В и С
1.3. Заключение
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование уровня апоптоза и экспрессии белков Fas и FasL в ткани печени больных ХВГ В и С
3.1.1. Анализ основных клинико-лабораторных показателей исследованной группы больных
3.1.2. Исследование уровня апоптоза гепатоцитов и клеток лимфо-шстиоцитарного инфильтрата в печени больных ХВГ В и С с помощью метода TUNEL in situ
3.1.2.1. Характеристика препаратов, полученных при окрашивании контрольных образцов ткани печени по методу TUNEL
3.1.2.2. Характеристика препаратов печени больных ХВГ В и С при окрашивании по методу TUNEL
3.1.2.3. Сравнительный анализ результатов исследования уровня апоптоза клеток печени у больных хроническими вирусными гепатитами В и С
3.1.3. Иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии белков Fas и FasL в ткани печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С
3.1.3.1. Результаты иммуногистохимического исследования уровня экспрессии белков Fas и FasL в контрольных образцах ткани печени
3.1.3.2. Результаты иммуногистохимического исследования уровня экспрессии белков Fas и FasL в препаратах биоптатов печени больных ХВГ В и С
3.1.4. Изучение взаимосвязи между уровнем апоптоза в клетках печени и уровнем экспрессии белков Fas и FasL в этих клетках у больных ХВГ В и С
3.1.5. Обсуждение результатов исследования уровня апоптоза и уровня экспрессии белков Fas и FasL в ткани печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С
3.2. Исследование уровня апоптоза в сравнении со степенью повреждения ДНК в мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови больных ХВГ В и С

3.2.1. Исследование динамики спонтанного апоптоза лейкоцитов периферической крови при культивировании in vitro в течение суток
3.2.2. Исследование уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови больных ХВГ В и С непосредственно после выделения и после культивирования in vitro в течение суток
3.2.3. Оценка степени повреждения ДНК лейкоцитов периферической крови больных ХВГ В и С по скорости щелочной денатурации ДНК лизатов клеток
3.2.4. Сравнение уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови больных ХВГ В и С со степенью повреждения ДНК этих клеток
3.2.5. Анализ взаимосвязи уровня апоптоза свежевыделенных и культивированных in vitro в течение суток мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови и степени повреждения ДНК этих клеток у больных ХВГ В и С
3.2.6. Анализ уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови в сравнении с уровнем сывороточного TNF-cc у больных хроническим вирусным гепатитом
3.2.7. Исследование взаимосвязи между уровнем апоптоза ЛПК больных ХВГ В и С и основными биохимическими (лабораторными) характеристиками крови этих больных
3.2.8. Обсуждение результатов исследования уровня апоптоза и степени повреждения ДНК
лейкоцитов периферической крови больных ХВГ В и С
З.З.Заключение
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛТ- аланинаминотрансфераза
АСТ- аспартатаминотрансфераза
ВГ, ВГВ, ВГС - вирусный гепатит В и С, соответственно
ВИЧ- вирус иммунодефицита человека
ИГА- индекс гистологической активности
ИФ- индекс фиброза
ЛПК- лейкоциты периферической крови
МЛПК- мононуклеарные лейкоциты периферической крови
ПЦР- полимеразная цепная реакция
сщдд- скорость щелочной денатурации ДНК
УФ- ультрафиолетовое излучение
ФБС - фетальная бычья сыворотка
ФИТЦ- флуоресцеинизотиоцианат
ФНО, TNF - фактор некроза опухолей
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ХВГ- хронический вирусный гепатит
хг- хронический гепатит
цтл- цитотоксические Т-лимфоциты
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
APES - aminopropyltrietlioxysilane, аминопропилтриэтоксисилан
FADD - Fas-associated death domain, домен смерти, связанный с
рецептором Fas Fas (АРО-1, CD95) - белок клеточной поверхности
FasL - Fas ligand, Fas-лиганд
gld- generalized limphoprolipherative disease, мыши с
мутантным геном FasL, имеющие конститутивные аутоиммунные лимфопролиферативные заболевания НВУ - hepatitis В virus, вирус гепатита В
HCV - hepatitis С virus, вирус гепатита С
ICE- interleukin 1 (З-converting enzyme, протеазы, участвующие в
образовании интерлейкина 1(

1.2.5.2. Основные этапы иммунного ответа организма на инфекцию вирусами гепатита В и С. Роль цитотоксических Т-лимфоцитов в индукции апоптоза гепатоцитов при вирусных гепатитах. Инфекция вирусами гепатита В и С сопровождается неспецифическим гуморальным, а также специфическим гуморальным и клеточным ответами. Среди антигеннеспецифических эффекторных механизмов важнейшее место занимают интерфероны (ИФН) [93]. К настоящему времени накоплено значительное количество информации об ИФН двух типов: к I типу относятся ИФН-а и ИФН -р и ко И -ИФН-у. Интерфероны I типа продуцируются многими типами клеток (макрофаги, лимфоциты, фибробласты) в ответ на чужеродную генетическую информацию. ИФН-у продуцируется только двумя видами ядросодержащих клеток: Т-лимфоцитами в процессе активации - при взаимодействии с антиген-представляющим макрофагом; натуральными киллерными клетками (NK) - при взаимодействии с клетками-мишенями. Под действием интерферонов развивается целый каскад реакций, проявляющихся в виде трех основных эффектов - противовирусного, антипролиферативного и иммуномодулирующего. Антивирусный эффект ИФН-а заключается в том, что он активирует в клетке транскрипцию ряда генов (так называемых интерферон-зависимых генов), продукты которых блокируют процессы транскрипции и трансляции вирусного генома и индуцируют каскад реакций, приводящих, в конечном счете, к деградации вирусной РНК. Главными из интерферон-зависимых генов являются гены 2',5'-олиго-аденилатсинтетазы, протеинкиназы фактора инициации синтеза белка (eiF2), МхА-белка. Кроме такого прямого действия на вирусную репликацию, интерфероны также повышают восприимчивость инфицированных клеток к иммуноопосредованному уничтожению путем повышения экспрессии МНС класса I ла клеточной поверхности [13].
При вирусных гепатитах В и С система ИФН ведет себя по-разному [2]. Считается, что вирус гепатита В является слабым индуктором синтеза ИФН. При хроническом гепатите В отмечено снижение продукции эндогенного ИФН и способности лейкоцитов и лимфоцитов продуцировать ИФН-а и -у после их стимуляции вирусами in vitro [2]. При ВГС очень часто антивирусные свойства ИФН оказываются неэффективными, вероятно, потому что этот вирус имеет анти-интерфероновую защиту [38,46].
Развитие специфического гуморального иммунного ответа приводит к появлению антител к поверхностному антигену вируса гепатита В [95] и оболочечным белкам вируса гепатита С [68], что способствует клиренсу циркулирующих вирусных частиц, а индукция клеточного иммунного ответа приводит к появлению клонов специфических в отношении различных многочисленных вирусных антигенов Т-лимфоцитов, рестриктированных по