Фармакологическое исследование цитопротекторного действия нейротропных пептидов

• Автор: Сафарова, Эльмира Рафиговна
• Шифр специальности: 14.00.25, 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Механизмы повреждения нейронов при ишемическом инсульте
1.1.1. Нарушение мозгового кровообращения и повреждение нейронов
1.1.2. Некротические и апоптотические процессы при ишемии головного мозга
1.1.3. Метаболические реакции, приводящие к повреждению нейронов при
ишемии головного мозга
1.2. Модели повреждения нейронов i vi
1.2.1. Методы определения жизнеспособности клеток в культуре
1.2.2. Модель депривации кислорода и глюкозы
1.2.3. Модельглутаматной эксайтотоксичности
1.2.4. Модель окислительного стресса
1.2.5. Модель повреждения нейронов, вызванного недостатком
ростовых факторов
I.3. Исследование пептидных нейропротекторов на моделях
повреждения нейронов i vi
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
II. 1. Материалы
II.2. Методы исследования
.2.1. Культивирование клеток
.2.2. Повреждение клеток I2 различными стимулами
.2.3. Определения жизнеспособности клеток в культуре
.2.4. Определение интенсивности белкового синтеза в культивируемых клетках
.2.5. Определение продуктов деградации семакса в культуре клеток
.2.6. Определение количества АТФ в клетках
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
III. 1. Моделирование повреждения нейронов с использованием
культуры клеток
III. 1.1. Модель окислительного стресса
III. 1.2. Модель депривации ростовых и факторов
III.2. Сравнение методов определения жизнеспособности клеток в культуре
1.3. Защитное действие пептидных нейропротекторов на клетки РС в условиях окислительного стресса
Ш.3.1. Влияние семакса и церебролизина на выживаемость
дифференцированных и недифференцированных клеток РС Ш.3.2. Влияние времени внесения семакса и церебролизина на выживаемость клеток
1.3.3. Влияние ингибирования синтеза белков на цигопротекторную активность семакса и церебролизина
II 1.3.4. Устойчивость цитопротскторного действия семакса и церебролизина в культуре клеток РС Ш.3.5. Влияние семакса и церебролизина на способность клеток дифференцироваться после окислительного стресса Ш.4. Влияние семакса и церебролизина на уровень АТФ в клетке после окислительного стресса Ш.5. Совместное действие семакса и церебролизина на выживаемость культивируемых клеток НС Ш.6. Цитопротекторная активность фрагментов семакса
1.7. Сравнение эффективности защитного действия различных нейропротекторов в культуре клеток РС Ш.8 Влияние семакса и церебролизина на выживаемость клеток РС при депривации сыворотки и ростовых факторов Ш.9. Дифференцирующее действие церебролизина на культивируемые клетки РС ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Головной мозг является основным потребителем всей глюкозы, поступающей в организм , а по интенсивности дыхания занимает первое место среди всех органов. Снижение поступления глюкозы и кислорода в мозг вызывает нарушение метаболических процессов в нервной ткани. Характер происходящих изменений зависит от уровня кровоснабжения мозговой ткани . Первый критический уровень снижение мозгового кровотока до , что составляет менее мл на 0 г ткани мозга в минуту. Происходит снижение общего белкового синтеза в нейронах. Но при этом, наблюдается увеличение уровня экспрессии отдельных генов. Второй критический уровень снижение мозгового кровотока до , что составляет мл на 0 г ткани мозга в минуту. Происходит активация анаэробного гликолиза, повышение концентрации лактата и, как следствие, развитие лактатацидоза и цитотоксического отека. Третий критический уровень мозговой кровоток составляет порядка мл на 0 г ткани мозга в минуту. Такое снижение кровотока вызывает резкое падение уровня АТФ. В результате возникает дисфункция каналов активного ионного транспорта, дестабилизация клеточных мембран и избыточный выброс возбуждающих аминокислотнейротрансмиттеров. Мозговой кровоток составляет мл на 0 г ткани мозга в минуту. В нейронах нарушается ионный градиент, возникает аноксическая деполяризация мембран, что является признаком необратимого поражения клеток. В центре ишемического поражения ядре уровень кровотока составляет не более мл на 0 г в минуту . Необратимые изменения клеток возникают здесь через мин после начала ишемии вследствие аноксической деполяризации мембран рис. Это приводит к формированию очага некроза инфаркта. Ядро окружено зоной ишемической полутени пенумброй в которой уровень кровоток не опускается ниже мл . Эго живая ткань, в которой наблюдаются функциональные, но не структурные изменения. В связи с этим нейроны этой зоны хотя и остаются живыми, но проявляют сверхчувствительность к любым изменениям. Такое состояние нейронов в этой зоне продолжается в течение ч в случае острой фокальной ишемии и ч при глобальной ишемии. Длительность существования зоны пенумбры определяет границы терапевтического окна времени, когда нейропротекторная терапия, направленная на предотвращение гибели клеток, наиболее эффективна. Для исследования процессов, происходящих при ишемии, широко используются модели i iv. Большинство таких моделей основано на лигировании окклюзии одной или нескольких артерий, питающих головной мозг. Все модели можно разделить на две большие категории глобальной и фокальной ишемии. Для моделирования глобальной ишемии применяют 2сосудистую и 4сосудисгую окклюзию. При 4сосудистой окклюзии пережимаются две позвоночные артерии и временно лигируются две общие сонные. У крыс линии Вистар при этом наблюдается быстрое в течение секунд падение кровотока до 3 от нормального уровня в гиппокампе, стриатуме и коре мозга 6. В случае 2сосудистой окклюзии лигированию подвергаются только общие сонные артерии. При этом кровоток снижается только до от физиологической нормы и протекторная терапия при такой ишемиии более эффективна 4. Однако многие авторы подчеркивают, что в результате окклюзии артерий возникает неполная глобальная ишемия, так как кровоснабжение головного мозга может осуществляться через коллатеральные сосуды. Поэтому для моделирования полной глобальной ишемии используют декапитацию или лигирование всех артерий, отхошших от сердца 9, 8. В этих моделях кровоток падает до нуля или составляет 1 от нормы 6. В случае глобальной ишемии в зоне ядра уровень АТФ в течение минут снижается до по сравнению с нормой, а в зоне пенумбры составляет , 5. Степень повреждения нейронов сильно зависит от длительности окклюзии глобальная ишемия 2сосудистая окклюзия у хомячков в течение 3,5 мин приводит к гибели нейронов в области СА1 гиппокампа через семь дней, тогда как двухминутная окклюзия не вызывала заметных изменений нейронов этого слоя 7. Окислительный
Формирование ядерной зоны инфаркта ок. Рис. Схема процессов, происходящих при нарушении мозгового кровообращения составлена по работам ,.