Гетерогенность и функциональная пластичность макрофагов второго типа активации

• Автор: Грачев, Алексей Николаевич
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 214 с. : ил.

Содержание. . .
Список использованных сокращений
Введение ниопНммм1мм1имм1НМ1мм1М1иимМН1мИпи1МММп1Нммммнм
Обзор литературы. . . .
Часть 1 Макрофаги
Происхождение макрофагов
Метаболизм макрофагов. .
Рецепторы макрофагов.
Функции макрофагов
Концепция дихотомии макрофагальной активации.
Часть 2 Канцерогенез и воспаление.
Регуляция воспаления. . . .
Связь онкологических заболеваний с хроническим воспалением.
Часть 3 Опухоль ассоциированные макрофаги
Опухоль ассоциированные макрофаги маркер плохого прогноза
Цитокины определяют функцию опухоль ассоциированных макрофагов
Свойства опухоль ассоциированных макрофагов
Материал ы и методы . м . . м. . мм. и.
Выделение макрофагов из лейкоцитарной пленки тииинишммчмнкнииижтшнцниж
Цитокины, факторы роста и другие медиаторы.
Субтрактивная гибридизация
Анализ полученных клонов
Норзерн блот гибридизация.
Пробы для гибридизации.
Синтез кДНК для ПЦР и количественной ПЦР
Анализ альтернативного сплайсинга фибронектина
Количественная полимеразная цепная реакция.
Анализ дифференциальной экспрессии генов при помощи биочипов фирмы ix
Детекция белка фибронектина миннм1нмм1мимаиим1мнм1ммнммм1ммнм1ипи1 .
Анализ экспрессии белков XIII и .
Анализ фосфорилирования белка 2
Анализ фагоцитозной активности макрофагов
Анализ секреции цитокинов .
Анализ бактерицидной активности макрофагов 1НПМИИНпМ1МММН1МиН1И1МПН1Фи1Ж1ЖН
Антитела для иммунофлуоресценции
Получение стабильно трансфецированных клеточных линий 1Н1МЖЖЖ1Ж1ЖЖЖММ
Анализ эндоцитоза
Проточная цитометрия
Обработка вортманнином 1ИМНЖНМ1ЖМММиМНЖ1ЖЖНЖ1ЖЖЖЖНЖНЖЖМЖ1ЖМЖН1
Иммунофлуоресценция и конфокальная микроскопия.
Результаты .
Маркеры макрофагов второго типа активации
Клонирование человеческого и мышиного стабилина1.
Анализ экспрессии стабилина в различных тканях.
Анализ структуры белка стабилина1.
Стабилин1 отвечает за эндоцитоз в стабильно трансфецированных клетках СНО .
Вортманнин вызывает накопление в ранних эндосомах.
Вортманнин влияет на локализацию стабилина1 в человеческих макрофагах
Молекулярная гетерогенность популяции макрофагов второго типа
Поиск дифференциально экспрессирующихся генов.
Анализ экспрессии фибронектина и ШНЗ в макрофагах а
Анализ сплайсинга фибронектина.
Анализ экспрессии белка фибронектина.
Синтез компонентов внеклеточного матрикса и ферментов для его ремодсллинга стимулируется .4 и подавляется дексаметазоном
1Ь4 запускает, а глюкокортикоиды модулируют продукцию цитокиноп макрофагами второго типа. .
Глюкокортикоиды стимулируют фагоцитоз и экспрессию скавенджеррецепторов
Исследование пластичности макрофагального фенотипа.
Анализ экспрессии рецепторов к цитокинам на ТМТЬ2 поляризованных макрофагах
Продукция противовоспалительных цитокинов активируется при вторичной стимуляции Т2ассоциированными цитокииами и глюкокортикоидами
Зрелые макрофаги производят провоспалительные цитокины в ответ на бактериальные продукты, но не ТЫ цитокин 1РМатта
Ответ макрофагов регулируется на уровне мРНК.
Кинетика продукции цитокинов.
Анализ фагоцитозной активности макрофагов после вторичной стимуляции
Анализ бактерицидной активности макрофагов после вторичной стимуляции
Анализ 1Ы7ВК маркера макрофагов второго типа
Анализ сплайсвариантов 1ЬВЯ.
Анализ экспрессии белка 1ЬВ.
Активация макрофагов трансформирующим фактором роста бета
ТСРр1 активирует экспрессию 1ЬВИ не только в моноцитах, но и в зрелых макроафгах второго типа .
Анализ дифференциальной экспрессии генов в зрелых макрофагов, стимулированных И .
Подтверждение данных, полученных при помощи биочипов.
Анализ экспрессии генов раннего ответа в 2i4 стимулированных i
Дексаметазон регулирует поверхностную экспрессию ТСРрШ
Дексаметазон приводит к поверхностной экспрессии рецептора к ТРР
Кинетика и дозозэвисимость действия дексаметазона на поверхностную экспрессию II
Функциональная активнось II.
Влияние дексаметазона на негативную обратную связь зависимого сигнального пути.
Обсуждение результатов
Разнообразие макрофагальных фенотипов
Модель опухоль ассоциированных макрофагов.
Сложность системы мононуклеарных фагоцитов ННЙИНИИППИ
Комплексная система внутриклеточной передачи сигнала
Процессы везикулярного транспорта в макрофагах
Математическое моделирование. .
Математические модели путей передачи сигнала.
Построение моделей везикулярных процессов.
Калибровка модели . .
Заключение
Выводы .
Список литературы


Стимуляция макрофагов I4 активирует экспрессию еще одного рецептор низкой аффинности , связывающегося с I. Рецепторы к компонентам системы комплемента включают I, 3 и 4, которые отвечают за узнавание, связывание и интернализацию опсонизированных частиц i, . Макрофаги также экспрессируют большое количество рецепторов к цитокинам и ростовым факторам. Рецепторы к цитокинам подразделяются на семейства в зависимости от гомологии с одним из следующих рецепторов , I3, , , иммуноглобулинподобный рецептор, и . Сигнальные системы, активируемые этими рецепторами, зачастую используют киназную активность как первый этап передачи сигнала. Далее происходит активация различных транскрипционных факторов, среди которых стоит отметить , активируемый в ответ на и I, транскрипционные регуляторы семейства i iv ii, активируемые в результате действия I, I4 и I и белки семейства , активируемые в ответ на стимуляцию клеток
ростовыми факторами семейства . Воздействие отдельных цитокинов или их комбинаций на макрофаги способно существенно изменить их функцию. Так I2 усиливает противоопухолевую активность макрофагов v , , I1 приводит к продукции и I1, I4 и I приводят к повышению экспрессии маннозного рецептора и повышенной презентации антигена i . I усиливает кислородный взрыв и бактерицидную активность , . Таблица 2. Рецепторы моноцитов и макрофагов. I.4, аполипопротеины В и Е. Рецепторы пептидов и 1,2,5дегидроксил витамин ЭЗ. Патогенспецифичные молекулярные паттерны , олигонуклеотиды и т. В дополнение к широкому спектру цитокиновых рецепторов, на поверхности макрофагов определяется большое количество различных рецепторов хемокинов i, , . Среди этих рецепторов есть представители всех описанных семейств 1, 2, 5 из семейства рецепторов СС хемокинов, X1, X2, X4 из семейства рецепторов СХС хемокинов и X из семейства рецепторов СХЗС хемокинов. Эти рецепторы позволяют в широком спектре регулировать перемещение макрофагов внутри организма в зависимости от его физиологического состояния. Особое место среди рецепторов макрофагов занимают рецепторы к липопротеидам. Эти рецепторы позволяют макрофагам связывать, интернализировать и разлагать холестеринсодержащие липопротеиды и липопротеиды низкой плотности i , а i , i , . К этим рецепторам относятся рецептор, узнающий аполипопротеин Е и аполипопротеин В, VI. I и II, отвечающие за эндоцитоз окисленных липопротеидов. В здоровом организме скавенджер рецепторы I и II отвечают за очистку крови от окисленных липопротеидов, однако при развитии атеросклероза эти рецепторы участвуют в патологическом накоплении холестерина внутри клетки. Следующий класс рецепторов лектинподобные рецепторы обладают специфичностью к олигосахаридам, оканчивающимся на фукозу, маннозу, галактозу и сиаловую кислоту V , i , . Эти рецепторы играют ключевую роль в обнаружении и связывании неопсонизированных патогенов. Структура маннозного рецептора одного из представителей семейства лектин подобных рецепторов, позволяет ему по структуре олигосахаридов четко определять, находится макрофаг в контакте с собственной клеткой организма или же он обнаружил патоген бактерию или клетку грибка. Распознав патоген, маннозный рецептор способен инициировать процесс фагоцитоза независимо от активации рецепторов комлемента или рецепторов i, . Помимо лектинподобных рецепторов макрофаги экспрессируют различные подобные рецепторы. Наиболее важными для осуществления макрофагами их защитных функций являются 2, 4 и 9. Широкий спектр лигандов и высокая степень специфичности этих рецепторов позволяет макрофагам определить практически любой патоген и выбрать адекватный ответ без участия какойлибо другой рецепторной системы i i, . Мононуклеарные фагоциты обеспечивают первую линию защиты организма от вторгающихся патогенов, таких как бактерии, вирусы, грибки и простейшие. Макрофаги способны активно перемещаться в точку вторжения патогена ориентируясь по градиенту молекул, производимых патогеном. В процессе узнавания могут одновременно участвовать несколько рецепторных систем система комплемента, рецепторы, лектинподобные рецепторы и скавенджер рецепторы , .