Адаптации энтомопатогенных аскомицетов (Ascomycota, hypocreales) к насекомым-хозяевам и факторам среды в условиях континентального климата Западной Сибири и Казахстана

• Автор: Крюков, Вадим Юрьевич
• Шифр специальности: 03.02.08
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 249 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Сбор, выделение и хранение культур грибов
1.2. Идентификация грибов
1.3. Выделение, идентификация, культивирование и хранение
бактерий
1.4. Морфолого-культуральные свойства грибов
1.5. Температурные преференции грибов
1.6. Геномный полиморфизм грибов
1.7. Уровень токсинов в культурах грибов
1.8. Антагонизм грибов и бактерий
1.9. Насекомые
1.10. Биотестирование
1.10.1. Материал для биотестнрований
1.10.1.1. Споры грибов
1.10.1.2. Бактерии
1.10.1.3. Культуральные среды грибов
1.10.1.4. Метаболиты растений, грибов и инсектициды
1.10.2. Обработка насекомых
1.10.2.1. Перкутанная обработка
1.10.2.2. Инъецирование
1.10.2.3. Пероральное тестирование
1.10.2.4. Парализация и заражение насекомых паразитоидами
1.10.3. Тестирование репеллентных и антифидантных свойств усниновой кислоты
1.10.4. Содержание зараженных и контрольных насекомых
1.10.5. Полевые эксперименты
1.11. Характеристики адгезии и роста грибов на/в насекомых
1.11.1. Уровень адгезии конидий на кутикуле насекомых
1.11.2. Уровень прорастания конидий на кутикуле
насекомых, ее экстрактах, жирных кислотах

1.11.3. Детекция грибов в гемолимфе насекомых
1.11.4. Урожайность конидий на погибших насекомых
1.12. Защитные системы насекомых
1.12.1. Изменение общего числа и отдельных типов гемоцитов
1.12.2. Уровень инкапсуляции
1.12.3. Определение активности фенолоксидаз
1.12.4. Определение активности неспецифических эстераз
и глутатион-5-трансфераз
1.12.5. Определение концентрации белка
1.13. Статистический анализ
1.14. Терминология
2. АНАМОРФНЫЕ И ТЕЛЕОМОРФНЫЕ ФОРМЫ ГРИБОВ, РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ДИАПАЗОН ХОЗЯЕВ, ЭПИЗООТИЙНОЕ ЗНАЧЕНИЕ
1.1. Анаморфные грибы
1.2. Телеоморфные грибы
1.3. Заключение
3. ТРОФИЧЕСКАЯ СПЕЦИАЛИЗАЦИЯ И ПАТОГЕННЫЕ СТРАТЕГИИ ГРИБОВ
3.1. Трофическая специализация Веаиуепа Ьазз1апа
3.2. Трофическая специализация и патогенные стратегии
Ме1агЫгшт
3.2.1. Особенности патогенезов и культуральные
свойства токсигенного и биотрофного штаммов
3.2.2. Защитные реакции насекомых при инфицировании токсигенным и биотрофным штаммами
3.3. Особенности развития микозов СогВусеря тПИаш
3.3.1. Развитие микозов Согйусерз пиШапя на неспецнфических хозяевах
3.3.2. Влияние культуральных сред Согс1усер$ тИИапз и их отдельных компонентов на насекомых
3.4. Заключение
4. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУР НА РАЗНЫЕ ПОПУЛЯЦИИ
ГРИБОВ И РАЗВИТИЕ МИКОЗОВ
4.1. Температурные оптнмумы разных популяций
энтомопатогенных грибов
4.1.1. Температурные преферендумы грибов Beauveria
bassiana в широтном градиенте Сибири и Казахстана
4.1.2. Температурные преферендумы грибов Metarhiziwn
и их активность в разных гигротермических режимах
4.1.3. Температурные преференции Cordyceps militaris
4.2. Защитные реакции насекомых при микозах в разных
температурных условиях
4.3. Заключение
5. ВЛИЯНИЕ СОПУТСТВУЮЩИХ ИНФЕКЦИЙ И ПАРАЗИТОИДОВ НА РАЗВИТИЕ МИКОЗОВ
5.1. Взаимоотношения в системе анаморфные грибы -
бактерии Pseudomonas - перелетная саранча
5.2. Синергизм Bacillus thuringiensis и Metarhiziwn robertsii
при инфицировании колорадского жука
5.3. Влияние парализации эктопаразитоидом Habrobracon hebetor
на развитие микозов у гусениц Galleria mellonella
5.4. Заключение
6. СИНТЕТИЧЕСКИЕ И ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКИЕ ИНСЕКТИЦИДЫ - СИНЕРГИСТЫ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ
6.1. Совместное действие фосфорорганического инсектицида
Актеллик и Metarhiziwn robertsii на колорадского жука
6.2. Моднфиканты усниновой кислоты - синергисты энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana
6.3. Заключение
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

1.12.4. Определение активности нсспецифических эстераз и глутатион-Б-трансфераз
Для определения активности неспецифических эстераз и глутатион-Б-трансфераз (ГСТ) образцы гемолимфы и жирового тела личинок насекомых отбирали в ФБ. Для предотвращения меланизации добавляли фенилтиомочевину до насыщения (4 мкг/мл). При отборе гемолимфы соотношение ФБ к образцу составляло 1:1. Образцы жирового тела гомогенезировали в ФБ в соотношении 0.06 г тканей на 1 мл буфера при помощи ультразвукового гомогенизатора. Образцы гемолимфы центрифугировали при 4°С в течение 5 минут при 500 д, а образцы жирового тела - 10 мин при 10000 g. Полученные супернатанты использовали для измерения активности детоксицирующих ферментов и количества белка.
Измерение активности неспецифических эстераз проводили по методу
С. К. Прабхакаран (РгаЬЬакагап е! а1., 1995) с изменениями. Для измерения активности данных ферментов в гемолимфе к 5 мкл образца плазмы гемолимфы добавляли 200 мкл р-нитрофепилацетата и инкубировали 3 мин при 28°С. Для измерения активности неспецифических эстераз в жировом теле к 5 мкл образца ткани добавляли 200 мкл р-нитрофенилацетата и инкубировали 10 мин при 28°С. Активность неспецифических эстераз определяли спектрофотометрически по образованию нитрофенила при длине волны 410 нм.
Активность ГСТ определяли по отношению к 2-нитро 5-тиобензойной кислоте (ДНХБ) методом В. Хабига (На1^ Ш а1, 1974). Инкубацию проводили при 25°С в течение 5 мин в 0,1 М калий-фосфатном буфере (pH 6,5), содержащем 1 мМ глутатиона, 1мМ ДНХБ и 20 мкл опытного образца. Реакцию инициировали добавлением раствора ДНХБ в ацетоне. Концентрацию 5-(2,4-динитрофенил)-глутатиона, образующегося во время реакции, определяли спектрофотометрически при длине волны 340 нм.