Молекулярно-генетический анализ особенностей структуры и экспрессии генов BRCA1/2 при раке яичников и молочной железы

• Автор: Шубин, Виталий Павлович
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 119 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. РАК ЯИЧНИКОВ
1.1 Заболеваемость раком яичников в России и в мире
1.2 ВКСЛ - ассоциированный рак яичников
2. ГЕНЫ В11СА1/2 И ФУНКЦИИ ИХ БЕЛКОВ
2.1 Гены ВКСА1/2
2.2 Белки В11СА1/2 и их функции
3. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ГЕНОВ ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКОВ
3.1 Этническая принадлежность и географическое положение популяции как фактор разнообразия частоты и спектра мутаций в генах ВКСА1/2 при раке яичников
3.2 Экспрессия генов В11СА1/2 в злокачественной опухоли
3.3 Злокачественная опухоль и ее микроокружение
3. 4 Эстрогеновый рецептор
3.5 Остеопонтин
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Пациенты
Анализ первичной структуры генов В11СЛ1 и ВКСА2
Выделение геномной ДНК
Полимеразная ценная реакция
Конформационно — чувствительный гель электрофорез
Автоматическое секвенирование
Анализ экспрессии генов BRCA1, BRCA2, OPN и ESR1
Выделение суммарной (тотальной) PIIK
Определение качества выделения суммарной РНК
Проведение реакции обратной транскрипции
ПЦР — Real time с продуктами обратной транскрипции
Статистический анализ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение пациентов с раком яичников на наличие мутаций в генах BRCA1/2
Гаплотипирование гена BRCA1 с мутацией 3819dcl5
Экспрессия генов BRCA1 и BRCA2 в злокачественной опухоли яичников71
Экспрессия генов BRCA1 и BRCA2 в злокачественной опухоли молочной железы
Экспрессия гена ESR1 в злокачественных опухолях яичников и молочной железы
Экспрессия гена OPN в злокачественных опухолях яичников и молочной железы
Экспрессия генов в прилегающей к злокачественной опухоли ткани
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
МГНЦ РАМН - Медико-Генетический Научный Центр Российской Академии
Медицинских Наук
РЯ — рак яичников
РМЖ - рак молочной железы
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
НРМЖЯ - наследственный рак молочной железы и яичников
НРЯ - наследственный рак яичников
Т.п.н - тысяч пар нуклеотидов
PSA - персульфат аммония
BSA - бычий сывороточный альбумин
ТЕ - трис- ЭДТА буфер
ЭДТА — этилендиаминтетраацетат
Трис - гидроксиметил аминометан
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени BRCA1/2 - breast cancer 1, 2 ESR1 — estrogen receptor a OPN - osteopontin

Обнаружено, что экспрессия всех генов снижена у больных раком яичников, относительно здоровых пациентов. Тем не менее, связи метилирования с изменением экспрессии исследованных генов найдено не было [Jiaze et al., 2010], однако от уровня экспрессии некоторых генов зависит подход и выбор препарата для лечения. Так ингибирование гена BRCA1 с помощью антисмысловых РНК повышает чувствительность к платине, в то время как увеличение экспрессии его повышает выживаемость опухолевых клеток у мышей при действии цисплатина, этопозида или доксорубицина [Sylvain et al., 2002].
В ряде научных работ было отмечено различное действие химиопрепаратов в зависимости от значения экспрессии гена BRCA1 при разной локализации злокачественной опухоли [Quinn et al., 2007; Egawa et al., 2001; Font et al., 2008]. При РЯ лучшую выживаемость после действия платины показали пациенты с низким уровнем экспрессии гена в сравнении с пациентами с высоким уровнем экспрессии, где эффективно действие токсанов. При РМЖ BRCA7-ассоциировапые пациенты имели лучшую выживаемость после действия доцетаксела [Byrski et al., 2008]. Подобную зависимость действия этих же препаратов обнаружено и при раке легкого [Reguart et al., 2008].
Таким образом, характер изменения экспрессии гена BRCA1 играет ключевую роль при выборе средств терапии. В отличие от эпигенетических и гистохимических показателей уровень мРНК гена имеет более устойчивые показатели в зависимости от типа злокачественных новообразовании и коррелирует со структурными перестройками гена.