Конструирование рекомбинантных белков для диагностики и терапии онкологических заболеваний

• Автор: Сыркина, Марина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 177 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИИ
ВВЕДЕНИЕ
I. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ В 15 ДИАГНОСТИКЕ И ТЕРАПИИ РАКА
1. Основные способы диагностики и терапии онкологических
ЗАБОЛЕВАНИЙ
1Л. Способы терапии, реализуемые в практической медицине
1Л Л. Краткая характеристика
1Л.2. Трудности, возникающие при терапии
1.2. Основные способы диагностики онкологических заболеваний
1.3. Онкомаркеры как мишень для высокоселективных
противоопухолевых препаратов и диагностических средств
1.3.1. Злокачественная трансформация клетки и причины появления
онкомаркеров
1.3.2. Типы онкомаркеров
1.4. Методы молекулярной диагностики онкологических
заболеваний
1.5. Методы таргетной (направленной) терапии онкологических
заболеваний
1.5.1. Подавление экспрессии онкогенов на уровне трансляции
1.5.2. Способы иммунотерапии рака
1.5.3. Бинарные агенты в диагностике и терапии онкологических
заболеваний
2. МУЦИН МЛС1 КАК СПЕЦИФИЧЕСКИЙ МАРКЕР РАКА ЖЕЛЕЗИСТЫХ
ОРГАНОВ
2.1. Краткая характеристика муциновых гликопротеидов
2.2. Мембранный муцин МиС1. Структура и свойства
2.3. Транспорт муцина MUC1 в ядро
2.4. Участие муцина MUC1 в передаче сигнала
2.5. Функционирование муцина MUC1 в здоровых тканях
2.6. Функционирование муцина MUC1 в опухолевой ткани
2.6.1. Сравнение нормального и опухоль-ассоциированного муцина
MUC1
2.6.2. Модификация функций муцина MUC1 при злокачественной
трансформации клеток
2.7. Иммуногенность муцина MUC1 и роль области VNTR в
развитии естественного иммунного ответа организма
2.7.1. Аминокислотная последовательность и пространственная
организация области VNTR
2.7.2. Антигенные эпитопы области VNTR опухоль- 55 ассоциированного муцина MUC1 человека
2.8. Муцин MUC1 в адресной терапии и иммунотерапии рака
3. ИНТЕГРИН аурз КАК СПЕЦИФИЧЕСКИЙ маркер метастатической
МЕЛАНОМЫ ЧЕЛОВЕКА
3.1. Краткая характеристика интегринов
3.2. Строение и свойства интегриновых рецепторов
3.3. Интегрин avp3 как член семейства интегриновых рецепторов
3.3.1. Экспрессия интегрина av(33 при онкологических заболеваниях
3.3.2. Последовательность и пространственная организация
минимального интегрин ау(33-узнающего пептида
3.4. RGD-содержащие пептиды в диагностике и терапии рака
4. Энтеротоксины Staphylococcus aureus при создании
ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ РАКА
4.1. Общая характеристика энтеротоксинов S.aureus
4.2. Строение энтеротоксинов S.aureus и природа индукции Т
клеточного ответа

4.3. Токсичность и участие костимуляторных молекул в развитии
суперантиген-индуцируемого Т-клеточного ответа
4.4. Мутантные формы суперантигенов, обладающие сниженным
«токсическим» действием на Т-лимфоциты.
ВЫВОДЫ
II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Материалы
1.1. Реактивы
1.2. Ферменты и антитела
1.3. Культуры клеток, бактериальные штаммы и плазмиды
2. Методы
2.1. Общие методы
2.2. Выделение суммарной ДНК из клеток S. aureus
2.3. Проведение полимеразной цепной реакции
2.4. Выделение и очистка His10-VNTR22
2.5. Выделение и очистка рекомбинантного SEH
2.6. Выделение и очистка рекомбинантных стрептавидин
содержащих белков
2.7. Электрофоретический анализ белков
2.8. Масс-спектрометрический анализ белков
2.9. Иммуноблоттинг
2.10. Иммуноферментный анализ
2.11. УФ-спектроскопия
2.12. Количественное определение рекомбинантного белка Hisio
vntr22
2.13. Взаимодействие стрептавидин-содержащих белков с FITC
биотином
2.14. Расщепление белков легкой цепью бычьей энтеропептидазы
2.15. Гель-фильтрация белков
состоящий из интерлейкина-2 и дифтерийного токсина. Такой белок способен уничтожать регуляторные Т-клетки, связываясь с рецептором интерлейкина-2 (С025). У 90% пациентов лечение при помощи данного препарата приводило к продукции специфичных к меланоме СЭ8+ Т-клеток (Каэки й а1., 2008).
1.5.3 Бинарные агенты в диагностике и терапии онкологических заболеваний.
Схематическое изображение бинарного агента представлено на рис. 1 «Адресующая» часть способна специфически связываться с мишенями на поверхности раковых клетках, в результате чего происходит селективное уничтожение или визуализация таких клеток при помощи «действующей» части.

}* > * / / 1 N адресующая действующая адресующая «адаптор» действующая часть часть часть часть

Рис. 1. Схематическое изображение бинарного агента.
«Адресующая» часть бинарной молекулы.
В роли «адресующей» части может выступать узнающее онкомаркер антитело или его фрагмент (БоЬМеп й а1., 1994) либо Т-клеточный рецептор (или его фрагмент) Щ а1., 1994). Кроме того, в том случае, когда
онкомаркером является молекула, участвующая в белок-белковых взаимодействиях, к ней может адресовать белок-партнер по связыванию, либо участвующий в ассоциации фрагмент белковой молекулы (пептид) или имитирующее такой фрагмент химическое соединение небелковой природы (пептидомиметик) ((8ип е! а1., 2011, Jaeger е! а1., 1996, Маэ-Моиппо е! а1., 2010).