Морфогенетические процессы в культуре кератиноцитов человека

• Автор: Шинин, Василий Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 154 с.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Культивирование кератиноцитов человека
1.1.1. Формирование культуры кератиноцитов
1.1.2. Межклеточная адгезия
1.2. Адгезия к субстрату
1.3. Пролиферация кератиноцитов
1.4. Использование трехмерных гелей в культивировании эпителиальных клеток
1.5. Взаимодействия кератиноцитов и фибробластов
1.6. Эпителиальная инвазия
1.6.1 Межклеточные взаимодействия в инвазии
1.6.2. Взаимодействия с субстратом в процессе инвазии
1.6.3. Регуляция инвазии
1.7. Эпителиальный морфогенез
1.7.1. Модель эпителиального тубулогенеза (branching morphogenesis, tubulogenesis)
1.7.2. Регуляция эпителиального морфогенеза
1.7.3. Механизмы морфогенеза эпителиальных трубок
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ45 ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Выделение первичных кератиноцитов человека и эпителия роговицы кролика
2.2. Культивирование первичных кератиноцитов человека на пластике, сорбированным коллагеном

2.3. Культивирование постнатальных и эмбриональных фибробластов человека
2.4. Получение сред, кондиционированных фибробластами
2.5. Выделение коллагена из хвостов крыс
2.5. Приготовление коллагенового геля
2.6. Получение колоний фибробластов
2.7. Кокультуры кератиноцитов и фибробластов
2.8. Культивирование кератиноцитов в коллагеновом геле (модель эпителиального тубулогенеза)
2.9. Ингибирование пролиферации кератиноцитов в коллагеновом геле митомицином С и тимидином
2.10. Культивирование кератиноцитов в низкой посадочной концентрации под коллагеновым гелем
2.11. Гистологическое исследование
2.12. Радиоавтографическое исследование пролиферации кератиноцитов
2.13. Трёхмерная компьютерная реконструкция фокусов инвазии эпидермальных кератиноцитов в коллагеновый гель
2.14. Морфометрический анализ роста кератиноцитов на коллагеновом геле
2.15. Статистическая обработка результатов
2.16. Материалы и реактивы, использованные в работе
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Сравнительный анализ влияния постнатальных и эмбриональных фибробластов на инвазию кератиноцитами коллагенового геля
3.2. Реконструкция эпителиального кластера инвазии кератиноцитами коллагенового геля
3.3. Изучение характера роста первичных кератиноцитов человека на модели эпителиального тубулогенеза в коллагеновом геле
3.3.1. Сравнительный анализ влияния кондиционированных фибробластами сред на тубулогенез первичных кератиноцитов человека в коллагеновом геле
3.3.2. Влияние блокаторов и стимуляторов пролиферации на тубулогенез
3.3.3. Интенсивность пролиферации кератиноцитов на начальных этапах формирования эпителиальных сфероидов
3.3.4. Пролиферация кератиноцитов в эпителиальных сфероидах и цистах
3.5.5. Пролиферация кератиноцитов в эпителиальных трубках и их предшественниках
3.4. Формирование эпителиальных трубок и эпителиальных колоний при культивировании кератиноцитов под коллагеновым гелем.
3.5. Индукция тубулогенеза кератиноцитов роговицы кролика в коллагеновом геле средой, кондиционированной эмбриональными фибробластами человека
3.6. Роль ВКМ в эпителиальном морфогненезе кератиноцитов человека
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

vivo этот белок локализуется в строме и не экспрессируется эпителиальными клетками. Считается, что in vitro эпиморфин синтезируется как эпителиальными клетками, так и фибробластами. Популяции эпителиальных клеток, экспрессирующих эпиморфин, при культивировании в коллагеновом геле формируют ветвящиеся трубки в присутствии факторов роста SF/HGF, EGF, KGF, FGF; этот процесс ингибируется антителами к эпиморфину. SF/HGF не индуцирует тубулогенез эпителиальных клеток мутантных по гену рецептора эпиморфина (Hirai et al, 1998).
SF/HGF (Scatter factor/Hepatocyte growth factor), впервые был описан как регулятор подвижности эпителиальных клеток и получил название фактора “рассеяния’Удиссоциации эпителиальных колоний (Stoker et al, 1987; Gherardi et al, 1993). В сыворотке крови лабораторных животных после частичной гепатэктомии был обнаружен фактор, стимулирующий рост гепатоцитов в культуре. Вскоре была показана идентичность SF и HGF (Wiedner et al, 1991). Этот фактор роста не синтезируется фибробластами дермы, но в больших количествах экспрессируется клетками папиллярного сосочка волосяного фолликула (Lindner et al, 2000). SF/HGF является физиологическим лигандом Met, основного рецептора SF/HGF. Met является продуктом онкогена c-met.
In vivo SF/HGF является индуктором морфогенеза эпителиальных органов (печени, легких, желез), а также принимает участие в формировании плаценты, скелетной мускулатуры, ангиогенезе и опухолевом росте (Peters et al, 1994; Schuchardt et al, 1994; Bladt et al, 1995; Schmidt et al, 1995; Uehara et al, 1995; Moore et al, 1996; Pichel et al, 1996; Sunchez et al, 1996).
In vitro SF/HGF индуцирует реализацию тканеспецифичных морфогенетических программ эпителиальных клеток различных типов в коллагеновом геле (Montesano et al, 1991а, b; Brinkmann et al, 1995; Berdichevsky et al, 1994; Sasaki, Enami 1999; Lipschutz et al, 2000). SF/HGF является фактором мезенхимного происхождения, его наличие в кондиционированной эмбриональными фибробластами среде подтверждено