Роль агглютинирующих белков азотфиксирующих бацилл и ризобий в жизнедеятельности бактерий и при взаимодействии с растениями

• Автор: Карпунина, Лидия Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 315 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Агглютинины (лектины) бактериального происхождения
1.1. Агглютинины почвенных азотфиксирующих бактерий
Глава 2. Значение углевод-белкового узнавания при формировании различного рода азотфиксирующих систем
2.1. Участие лектинов растений в углевод-белковом взаимодействии бактерий с растениями
2.2. Бактериальные агглютинины в специфической адгезии в системе бактерия-растение
Глава 3. Роль бактериальных агглютининов в метаболизме клеток
Глава 4. Пектины-ферменты
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 5. Материалы и методы исследований
5.1. Материалы исследований
5.1.1. Объекты исследований, условия культивирования
5.1.2. Препараты
5.2. Методы
5.2.1. Выделение, очистка агглютининов ризобий и бацилл
5.2.2. Определение гемагглютинирующей активности
5.2.3. Определение углеводной специфичности агглютининов
5.2.4. Определение молекулярной массы белков
5.2.5. Определение аминокислотного состава белков
5.2.6. Определение углеводного состава белков
5.2.7. Определение локализации агглютинирующих белков..
5.2.8. Исследование прикрепления бацилл и ризобий к корням растений методом световой и электронной микроскопии
5.2.9. Определение активности ферментов
5.2.10. Определение адсорбции агглютининов на эритроцитах крови человека
5.2.11. Получение мутанта, дефектного по гемагглютинирую-гцей активности
5.2.12. Определение адсорбции клеток ризобий и бацилл на корнях проростков растений
5.2.13. Выделение фракций корней растений
5.2.14. Метод интерфазных колец преципитации в геле
5.2.15. Получение антител к бактериальным агглютининам
5.2.16. Метод иммунодота
5.2.17. Метод электроблотинга
5.2.18. Определение углеводного состава фракции экзокомпонентов корней пшеницы
5.2.19. Измерение выхода из клеток низкомолекулярных компонентов
5.2.20. Определение бактерицидных свойств агглютинирующих белков
5.2.21. Статистическая обработка
Глава 6. Агглютинины ризобий и бацилл, их физико-химическая и
биологическая характеристика
6.1. Обнаружение, выделение, определение специфичности
агглютининов ризобий
6.2. Обнаружение, выделение, определение специфичности агглютининов бацилл
6.3. Физико-химическая характеристика агглютининов

ризобий
6.4. Физико-химическая характеристика лектинов бацилл
6.5. Локализация агглютининов ризобий и лектинов бацилл.
6.6. Обнаружение ферментативной активности у агглютининов ризобий
6.7. Обнаружение протеолитической активности у лектинов Р.ро1утуха 1
Глава 7. Роль агглютинирующих белков при взаимодействии бактерий
с растениями
7.1. Изучение адгезивных свойств агглютинирующих белков
при взаимодействии бактерий с корнями растений
7.1.1. Изучение адгезивных свойств ризобиальных клеток и роль агглютининов в прикреплении ризобий к
корням проростков гороха
7.1.2. Взаимодействие агглютининов ризобий с фракциями корней гороха
7.1.3. Взаимодействие агглютининов ризобий с лектинами корней гороха и пшеницы
7.1.4. Изучение адгезивных свойств клеток бацилл и участие лектинов в прикреплении бацилл к корням проростков пшеницы
7.1.5. Исследование взаимодействия лектинов бацилл с фракциями корней проростков пшеницы
7.1.6. Исследование взаимодействия лектинов бацилл с фракциями корней проростков гороха и лектином
гороха
7.2. Исследование ферментативной активности лектинов бацилл и агглютининов ризобий после взаимодействия их с углеводной частью фракции экзокомпонентов корней

Наиболее сильными ингибиторами для этих агглютининов были о-нитрофенил-О-галактопиранозид и изопропинол-О-тиогалактозид (Eideis, Proia, Hart, 1983). P. Balding с соавт. (1981) при изучении углеводной специфичности нескольких типов агглютининов C.botulinum установили, что активность агглютининов А и В подавлялась как, а так и ß-D-галактозидами, а также галактосодержащими полисахаридами Pneumococcus типа XIV, в то время как активность агглютининов типа С и Д не ингибировалась ни одним из простых моно,- ди или олигосахаридов. Авторы обнаружили высокую ингибирующую активность ряда ганглиозидов, содержащих нейраминовую кислоту (Gmi, GDla, Gdib, Gп), по отношению к агглютининам типа А, С и Д, но не В. Y. Kamata с соавт. (1988) было показано, что связывание агглютининов типа Е с некоторыми ганглиозидами (GMia, Gma, GDib, GTi, Gq!b), а также с фосфолипидами зависит от значения pH среды. Так, токсин C.botulinum типа Е связывается с вышеназванными ганглиозидами только при pH 5,0, а с другими ганглиозидами и фосфолипидами при pH 4,0. Авторы предположили, что токсин прикреплялся к нейтральной поверхности эукариотических клеток, в основном за счет сиалоспецифичности, и это прикрепление зависело от заряда связывания, которое достигалось неспецифическим гидрофобно (фос-фолипид)-гидрофильно (токсин) взаимодействием. Было сделано предположение, что за гемагглютинирующую активность отвечает ботулинический токсин, и что в зависимости от pH, токсин и гемагглютинин, либо образуют комплекс, либо диссоциируют. Дальнейшие исследования (Иванова и др., 1983) показали, что гемагглютинин имел белковую природу и состоял из мономера с молекулярной массой 53 кДа и тримера с молекулярной массой 160 кДа. Мономер включает две субъединицы по 13 и одну 27 кДа, ковалентно связанные между собой двумя S-S мостиками. На каждую молекулу белка с молекулярной массой 53 кДа выявлены 4 SH-группы, две из которых являются частично экранированными и две - скрытыми.