Изучение особенностей пролиферации эмбриональных клеток японских ускорению стареющих мышей

• Автор: Семенова, Ирина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с.

Оглавление.
Список сокращений
Введение Обзор литературы
1. Клеточный цикл
1.1 Состояние пролиферативного покоя
1.2. Факторы роста
1.3. Активация тирозкикииазных рецепторов факторами роста
2. Проблема концевой недорепликации
2.1. Пролиферация клеток in vitro. Ограничение пролиферативного потенциала клеток многоклеточных организмов
2.2. “Теломерная теория старения, нлн теория маргинотомии” А. Оловникова
2.3. Экспериментальные подтверждения теории А.М. Оловникова
3. Теломеры
3.1. Теломерный повтор
3.2. Функции теломер
4. Теломераза
4.1. РНК - компонент теломеразы
4.2. Теломеразные белки
4.3 Работа теломеразы
4.4. Механизм образования 3’ - одноиепочечного фрагмента
4.5. Экзонуклеазная активность теломераз
4.6. Альтернативные механизмы поддержания длины теломер
4.7. Ингибиторы обратных транскриптаз нуклеотидной природы
5. Пролиферация клеток различных видов в культуре
5.1. Морфологические стадии старения фибробластов в культуре 5 .2. Фибробласты человека в культуре
5.3. Старение, или Ml
5.4. Состояние “кризиса”, или М2
5.5. Клетки мыши в культуре
6. Ускоренно стареющие мыши линий SAMP и SAMR

л *»

-у Ст-рением клеток культуре и естественным организма
»I. Корреиаши пршифчигемюго юктс
Продолжительностью жизни М
72 4«
73 ”рол,,*чпн““*лоте"ш'"-“"р»»«.«™и.„ J8
лрогер1||к «
* Яш. 0« «*««„, „тнш1ша делений ш >ivo
Материалы и методы

1 Животные линий sАМР-1, SAMR-1, СВА 2- Получение животных с датированной беременностью 3 Получение эмбриональных фнбробластов мыши 4' Усло*н* культивирования клеток 5 Замораживание клеточных культур 6- Размораживание клеточных культур
7 К>'’‘™*»Р0»*»и« ««ТО, . т'утюперекис, ,морол,
Выярдеине активности эндогенно« Р-галактоэидазы-pH-« 0)
ъш+рпшоа „ С1М(улдши рккяшм фторши 10. Радноавтография
И. Исследование фосфорилированиятирозина
12. Определение теломеразной активности (ТАК)
13 Ингибиторы обратных транскриптаз
14. Изучение теломер
15. Гибридизация in situ
16. Приготовление хромосомных препаратов
Результаты
1 Рост эмбриональных фнбробластов мышей в культуре
2 ПаР,"еП’“ Р0СТа ” СИР'"“ з«6р«ои»ииык
фнбробластов мышей линий SAMP-1, SAMR-1 и СВА
3. Пролиферативный потенциал ЭФМ линий SAMP-1, SAMR-1 и СВА
4. Врем* переживания клеток в неделящемся состоянии
5- Выявление активности эндогенной Ц-галактозидазы (рН-6.0)

6. Пролиферативный ответ эмбриональных фибробластоа мышей на стимуляцию
факторами роста
7. Уровень фосфорнлироаания белков по тирозиновым остаткам
8. Спонтанная трансформация
9. Теломераэная активность (ТАК)
10. Подавление функции теломеразы с помощью ингибиторов обратных 74 траискриптаэ
11. Изучение теломер и кариотипа эмбриональных фибробластоа мышей линий 76 SAMP-1 и SAMR
Обсуждение
1. Морфологически старение клеток SAM неотличимо от старения нормальных
мышиных фибробластоа
2. Повышенная активность эндогенной 0-галагтозидазы (рН=*6,0) отражает
ускоренное старение эмбриональных фибробластоа мышей SAM
3. Снижение пролиферативного ответа на стимуляцию факторами роста в
процессе старения эмбриональных фибробластоа мышей в культуре
4. Вызывается ли спонтанная трансформация эмбриональных фибробластоа
мышей в культуре повышением (появлением) ТАК?
5. Существует два пути спонтанной трансформации
6. Связь длины теломер у мышей и пролиферативного потенциала их клеток в
культуре
7. Объяснение того, как относительно длинные теломеры мыши могут
индуцировать пролиферативное старение
8. Тройственная корреляция между продолжительностью жизни мышей
пролиферативным потенциалом их эмбриональных фибробластов и временем переживания состарившихся фибробластов в неделяшемся состоянии
9. Повышенная нестабильность ДНК в клетках SAM может объяснить все
наблюдаемые в наших экспериментах явления
Выводы
Список литературы
Благодарности
2) мсжтеломерной гомологичной рекомбинации. С помощью этого типа рекомбинации удлиняют саои теломеры дрожжи S. cerevisiae и клетки человека (ReddeI et al.. 2001; Nayloretal.. 2001: Louis et al.. 2001; Marciniak et al.. 2001).
3) виутрителомерной рекомбинации с образованием теломерной петли (t-loop) (см. рис 6). когда рекомбинация происходит либо с внутренними участками теломерной ДНК (если теломера достаточно длинная), либо с участками прителомерной ДНК (если теломера короткая). Такой способ найден у дрожжей S. cerevisiae и клеток человека (Redde! et al.. 2001; Varley et al . 2001).
Ретротраиспозиция. Ретротранспоэонное удлинение теломер найдено у Drosophila melanogaster и родственных двукрылых насекомых (теломеры достраиваются двумя ретротранспозонвми: НеТ - А и TART) (Mason, Biessmann, 1995, Pardue et al, 19%), у двух представителей рода Chironomus (Kamnert et al., 1998), у лука (Allium сера) и некоторых лилейных (Pich, Schubert, 1998), а также у Aloe.
4.7. Ингибиторы обратных траискрнптаз нуклеотидной природы.
Ингибиторы обратных транскриптаз, такие как З’-азидо.З’-дезокситимидин (AZT), карбоаир и 2’,3’-дидезоксицитидин (ddC) - химически синтезированные аналоги природных нуклеозидов тимидина, гуанозина и цитидина (рис 10). Известно, что AZT. карбовир и ddC превращаются в клетках млекопитающих и человека в соответствующие 5'-трифосфаты и терминируют синтез нуклеиновых кислот, который осуществляют полимеразы, т.к. они вступают в конкуренцию с нормальными нуклеотидами (Краевский. 1992, 1994). Из-за отсутствия ОН-группы в 3’-положении у этих ингибиторов синтез ДНК после присоединения терминирующих нуклеотидов не может продолжиться.
Рис. 10: 3’ -азидо.З'-дезокситимидин (AZT), карбовир и 2’.3 -дидезоксицитидин (ddC)

carbovir