Мембранотропные свойства аминокислотных производных фуллерена C60 и обусловленная ими биологическая активность

• Автор: Фрог, Елена Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Место защиты: Черноголовка
• Количество страниц: 111 с. : ил.

Список сокращений
Актуальность проблемы
Цель и задачи работы
Научная новизна работы
Научно-практическая значимость
Апробация работы
Глава 1. Водорастворимые производные Бакминстерфуллерена
§1.1. Гидрофилизация и биосовместимость фуллеренов
§ 1.2. Гидроксифуллерен
§ 1.3. Гексасульфобутилфуллерен (ГСБФ)
§ 1.4. Карбоксифуллерены
§ 1.5. Фуллеропирролидины
§ 1.6. Аминокислотные и пептидные производные
фуллерена С6о
§ 1.7. Противовирусная активность фуллерена С^о
Глава 2. Материалы и методы
Глава 3. Мембранотропные свойства АПФ и стереоспецифичность их проницаемости через липидного
бислой
§3.1. Проницаемость липидного бислоя для АПФ
§ 3.2. Стереоспецифичность действия энантиомеров
аминокислотных производных фуллерена С60 на
липидный бислой фосфатидилхолиновых липосом
Глава 4. Модуляция активности мембраносвязанных
ферментов и фотозависимость действия АПФ
§4.1. Влияние АПФ на каталитическую активность

моноаминооксидазы А и моноаминооксидазы В
§ 4.2. Стереоспецифичность действия энантиомеров АПФ на
функционирование МАО-А и МАО-В
§ 4.3. Фотозависимость влияния АПФ на каталитическую
активность МАО-А и МАО-В
Глава 5. Антиоксидантная активность и противовирусное
действие АПФ
§ 5.1. Влияние АПФ на пероксидное окисление липидов в
биологических мембранах
§ 5.2. Влияние АПФ на ПОЛ при цитомегаловирусной
инфекции
Заключение
Выводы
Публикации по теме диссертационной работы
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Бакминстерфуллерен - С6о! ВИЧ - вирус иммунодифицита человека;
АПФ - аминокислотные производные фуллерена Сбо! МАО-А
моноаминооксидаза А; МАО-В - моноаминооксидаза В; ПАВ
поверхностно активные вещества; LD50 - доза препарата, при которой
погибает 50 % животных; 150 - концентрация, при которой происходит
ингибирование ферментативной активности на 50 %; ДК - диеновые
конъюгаты; МДА - малоновый диальдегид; ГСБФ
гексасульфобутилфуллерен; ЛПНП - липопротеиды низкой плотности; С3,
D3 - изомеры карбоксифуллерена; ПВП - поливинилпирролидон; GST
глутатион S-трансфераза; GSH-Px- глутатионпероксидаза; GRглутатионредуктаза; AMNa- натриевая соль аминомасляной кислоты;
AKNa - натриевая соль амннокапроновой кислоты; ПОЛ - пероксидное
окисление липидов; ТХУ - трихлоруксусная кислота; А0 - оптическая
плотность контрольного образца в относительных единицах; А]
оптическая плотность опытного образца в относительных единицах; с
молярный коэффициент экстинкции; ФЭЧ - фибробласты эмбриона
человека; ЦМВИ - цитомегаловирусная инфекция; ИМ - инфекционная
множественность; БОЕ - бляшкообразующие единицы; ЭД50 - эффективная
доза противовирусного действия - концентрация вещества, при которой
происходит подавление вирусной активностир па 50 %; ЦД50
соединения, при которой остаются жизнеспособными 50 % клеток; К<,
константа скорости тушения фосфоресценции эритрозина в суспензии
фосфатидилхолиновых липосом; КСо2+ - константа скорости тушения
эритрозина в липосомах в присутствии ионов Со ; Ко - константа скорости тушения фосфоресценции эритрозина в водных растворах; г -время жизни фосфоресценции зонда; 1/т - скорость затухания
фосфоресценции эритрозина; ИС - индекс селективности.

эффективную дозу противовирусного действия соединения (ЭД50) как концентрацию, при которой происходит подавление активности ЦМВ на 50%.
3. Цитотоксичность Сбо-AMNa определяли по изменению морфологии и по количеству жизнеспособных клеток ФЭЧ методом исключения витального красителя трипанового синего (dye exclusion test). В культуру ФЭЧ вносили C6o-AMNa в различных концентрациях. Клетки ежедневно снимали смесью трипсина и версена, прижизненно окрашивали 0,1 % раствором трипанового синего в течение 5 минут и подсчитывали число жизнеспособных (неокрашенных) и нежизнеспособных (голубых) клеток в камере Горяева. Жизнеспособность клеток в популяции оценивали как отношение жизнеспособных клеток к общему числу клеток и выражали в %. Для определения цитотоксичности C6o-AMNa оценивали дозу соединения, при которой остаются жизнеспособными 50 % клеток ФЭЧ (ЦД50).
Определение зависимости развития цитомегаловирусной инфекции от интенсивности ПОЛ.
Противовирусные свойства C60-AMNa и C60-AKKNa изучали на модели ЦМВИ in vitro. Клетки фибробластов легких эмбриона человека (ФЭЧ), полученные из банка клеточных культур НИИ Вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, были заражены ЦМВ инфекцией и проинкубированы с производными фуллерена - Сбо-AMNa и C6o-AKKNa. В качестве препарата сравнения использовали ганцикловир, применяемый во врачебной практике. Контролем являлась неинфицированная культура ФЭЧ.
В полученных из НИИ Вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН образцах определяли содержание белка и МДА (интенсивность ПОЛ). В пробу отбирали клеточную культуру так, чтобы в исследуемом образце