Характеристика постоянной линии клеток SSO-3 пула паренхиматозных органов сибирского осетра Acipenser baerii

• Автор: Щелкунова, Юлия Петровна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 152 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1 ВВЕДЕНИЕ
1.1 Актуальность темы
1.2 Цель и задачи исследования
1.3 Научная новизна
1.4 Практическая значимость результатов
1.5 Основные положения, выносимые на защиту
1.6 Апробация результатов работы
1.7 Публикация результатов
1.8 Личный вклад
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 История изучения вопроса
2.2 Культуры клеток рыб, депонированные в национальных коллекциях разных стран
2.3 Получение перевиваемых линий клеток осетровых рыб
2.4 Способы культивирования клеточных линий
2.5 Характеристика клеточных линий
2.5.1 Цитоморфологическая характеристика
2.5.2 Параметры культивирования
2.5.3 Клонообразование
2.5.4 Кариологический анализ и его особенности у осетровых рыб..
2.5.5 Подтверждение видовой специфичности
2.5.6 Чувствительность к вирусам
2.5.7 Оценка микробной контаминации культур клеток
2.6 Криоконсервация
2.7 Применение постоянных линий клеток
2.8 Заключение по литературному обзору
3 СОБСТВЕНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы и методы

3.1.1 Материалы
3.1.1.1 Рыбы
3.1.1.2 Вирусы
3.1.1.3 Культуры клеток
3.1.1.4 Реактивы
3.1.1.5 Праймеры
3.1.1.6 Питательные среды, растворы и сыворотки
3.1.1.7 Антисыворотки к вирусам рыб
3.1.1.8 Лабораторное оборудование и принадлежности
3.1.2 Методы
3.1.2.1 Культивирование постоянных клеточных линий рыб
3.1.2.2 Цитоморфологические методы
3.1.2.3 Изучение влияния параметров культивирования на пролиферативную активность клеток линии
3.1.2.4 Изучение влияния разных условий хранения на жизнеспособность клеток постоянной линии БвО-З
3.1.2.5 Изучение способности постоянной линии клеток ввО-З к колониеобразованию
3.1.2.6 Кариологические методы
3.1.2.7 Микробиологические методы
3.1.2.8 Флуоресцентный метод
3.1.2.9 Криоконсервация
3.1.2.10 Молекулярно-генетические методы
3.1.2.11 Вирусологические методы
3.1.2.12 Серологические методы
3.1.2.13 Статистические методы
3.2 Результаты исследований
3.2.1 Цитоморфологическая характеристика постоянно линии
клеток
3.2.2 Кариологическая характеристика постоянной линии клеток

3.2.3 Влияние параметров культивирования на пролиферативную активность клеток постоянной линии ЗЭО-З
3.2.4 Способность постоянной линии клеток Б80-3 к колониеобразованию
3.2.5 Видовая идентификация постоянной линии клеток ЭБО-З
3.2.6 Жизнеспособность клеток постоянной линии ББО-З при
разных условиях хранения
3.2.7 Жизнеспособность клеток постоянной линии ББО-З после криоконсервации
3.2.8 Контроль постоянной линии клеток БЬО-З на посторонние контаминанты
3.2.9 Чувствительность постоянной линии клеток ЬЬО-З к вирусам

3.2.10 Влияние “возраста” постоянной линии клеток БЬО-З на её чувствительность к вирусу весенней виремии карпа (ЬУСУ)
3.2.11 Влияние разных способов культивирования клеток линии ББО-З на урожай герпесвируса сибирского осетра и вируса весенней виремии карпа
3.2.12 Использование постоянной линии клеток ББО-З
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5 ВЫВОДЫ
6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
8 ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение 1 Паспорт постоянной линии клеток ЬБО-З пула
паренхиматозных органов сибирского осетра (Ас[ретег Ьаеги)
Приложение 2 Справка о депонировании на штамм постоянной линии клеток ЗЬО-З пула паренхиматозных органов сибирского осетра (АЫретег Ьаеги)

клеточные линии имеют кариотип, отличный от диплоидного кариотипа донорского вида, как по числу, так и по структуре хромосом [6, 42]. Известно, что большинство клеточных линий рыб являются гетероплоидными, однако, постоянная клеточная линия RBCF-1 из плавника золотой рыбки сохранила диплоидный кариотип [150].
Современные осетрообразные представляют очень интересную группу рыб с точки зрения филогении. Из всех позвоночных они обладают наиболее сложными кариотипами, что, прежде всего, заключается в больших хромосомных числах, 2п=116-250, из которых около половины представлены микрохромосомами, и в постепенном незаметном переходе одних типов хромосом в другие [6]. Так, модальное число хромосом в клетках культуры WSS-2 из селезенки белого осетра - 219, WSH-1 из сердца белого осетра -бимодальное - 237 и 243 [234], SSO-2 из пула внутренних органов сибирского осетра - 364 [69]. Полученные в 1995 г. F. Fontana с соавт. 3 линии клеток 15 пассажа от трех видов осетровых Acipenser baerii, Huso huso x Acipenser rutenus, Acipenser transmontanus, имели хромосомный набор 2n=246±10, 2n=120±8 и 2n=246±10, соответственно [137].
Тщательная кариологическая характеристика клеточных линий является необходимым требованием при проведении- многих видов вирусологических исследований, и особенно важна для культур, используемых для приготовления вакцин.
Совершенствование методов дифференциального окрашивания хромосом и комплексное использование этих методов для цитогенетического анализа привели к принципиально новым заключениям о кариотипической уникальности каждой клеточной линии и о возможности узнавания ее среди множества других линий различного видового происхождения. В настоящее время, применяя цитогенетический анализ, можно получить информацию о видовой принадлежности клеточной линии, интервале изменчивости числа хромосом и модальном классе клеток, присутствии маркерных хромосом в них [37].