Гетеротрофные бактерии техногенных субстратов как основа биопрепаратов-деструкторов нефтяных углеводородов и поверхностно-активных веществ

• Автор: Нгуен Виет Тиен
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Астрахань
• Количество страниц: 174 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Микроорганизмы в биологической очистке от нефтяных углеводородов
1.2. Поверхностно-активные вещества микроорганизмов и экологические функции биоПАВ, перспективные для использования в нефтяной отрасли
1.3. Микробиологическая деструкция поверхностно-активных веществ
2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Объекты исследований
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение углеводородокисляющих бактерий
2.2.2. Выделение слизеобразующий бактерий
2.2.3. Изучение фенотипических признаков выделенных культур
2.2.4. Определение оптимальных условий роста бактерий
2.2.5. Определение и анализ нуклеотидных последовательностей фрагмента гена 16Б рРНК
2.2.6. Определение эмульгирующей активности
2.2.7. Исследование липолитической активности бактериальных изо-лятов
2.2.8. Изучение способности исследуемых изолятов бактерий и бактериальных штаммов деструктировать нефтяные углеводороды
2.2.9. Изучение способности исследуемых изолятов бактерий и бактериальных штаммов деструктировать поверхностно-активные вещества (АПАВ и КПАВ)
2.2.10. Определение фитотоксичности исследуемых бактериальных штаммов
2.2.11. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. СКРИНИНГ ШТАММОВ УГЛЕВОДОРО ДОКИС ЛЯЮ-ЩИХ И СЛИЗЕОБРАЗУЮЩИХ БАКТЕРИЙ
ЗЛ. Получение накопительных культур углеводородокисляюших и слизеобразуюших микроорганизмов
3.2. Изучение свойств бактериальных изолятов
3.2.1. Изучение липолитической активности бактериальных изолятов
3.2.2. Изучение эмульгирующей активности бактериальных изолятов
3.2.3. Изучение способности бактериальных изолятов деструктировать нефтяные углеводороды
3.2.4. Изучение способности бактериальных изолятов деструктировать ПАВ
3.1.3. Идентификация исследуемых штаммов путем секвенирования ШрРНК
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ШТАММОВ
4.1. Определение оптимальных условий роста бактерий
4.2. Определение эмульгирующей активности бактериальные штаммов
4.3. Деструкция нефти бактериальными штаммами
4.4. Деструкция АПАВ бактериальными штаммами
4.5. Деструкция КПАВ бактериальными штаммами
4.6. Определение фитотоксичности исследуемых штаммов бактерий
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
Практические рекомендации
Список источников
Приложение 1. Эмульгирующая активность изолятов бактерий и бактериальных штаммов
Приложение 2. Деструкция нефти и ПАВ изолятами бактерий и бактериальными штаммами
Приложение 3 Культурально-морфологические признаки штаммов бактерий, выделенных из техногенных субстратов
Приложение 4 Оценка фитотоксичности бактериальных штаммов

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ НК - накопительная культура
УВОМ - углеводородокисляющие микроорганизмы
УВОБ - углеводородокисляющие бактерии
НУ - нефтяные углеводороды
ПАВ - поверхностно-активные вещества
АПАВ - анионные поверхностно-активные вещества
КПАВ - катионные поверхностно-активные вещества
НПАВ - неионогенные поверхностно-активные вещества
СМС - синтетические моющие средства
СВ - сточные воды
НШ - нефтешламы
КОЕ - колониеобразующая единица
ПА - питательный агар
ПБ - питательный бульон
БС - биосурфактанты

тедобывающей и горнодобывающей промышленности, в производстве керамики и технических смазок (Няникова, Виноградов, 1995).
Вискозиноподобный пептид, продуцируемый штаммом бактерий Pseudomonas extremiorientalis (Пат. РФ 2205878) обладает поверхностноактивными свойствами и, являясь биосурфактантом, позволяет более эффективно проводить биоочистку от загрязнений почвы и воды, не накапливаясь в окружающей среде за счет их полной утилизации путем микробного разложения по сравнению с синтетическими поверхностно-активными веществами.
Штамм Ps. putida ИБ 17 (Пат. РФ 2343193), обладает высокой продуктивностью экзополисахарида, и может быть использован, в частности, в нефтеперерабатывающей промышленности, за счет хорошей растворимости в высокоминерализованных пластовых водах.
Штамм Paenibacillus ehimensis IB 739 (Пат. РФ 2460780) используется в качестве продуцента экзополисахарида (25 г/л), обладающего высокими реологическими характеристиками и хорошей растворимостью в высокоминерализованных нефтепромысловых пластовых водах (кинематическая вязкость 0,1% и 0,25% водных растворов экзополисахаридов составляет 1,90 сСт и 5,45 сСт соответственно). Выделенный экзополисахарид представляет собой альгинат, содержащий в своем составе фрагменты P-D-маннуроновой (М) и a-L-гулуроновой (G) кислот, находящиеся в пиранозной форме и связанные в линейные цепи 1—>4 гликозидными связями соотношение M/G - 0,64. Молекулярная масса, определенная при помощи эксклюзионной ВЭЖХ, составляет 320 кДа. Полученный полисахарид нерастворим в холодной воде, хорошо растворим в горячей воде (при температуре от 60°С и выше).
Известна ассоциация штаммов бактерий Rhodococcus sp. ВКМ Ас-2532Д, Rhodococcus sp. ВКМ Ас-2533Д, Pseudomonas sp. ВКМ В-2387Д и Ps. putida ВКМ В-2380Д, продуцирующих биоэмульгаторы, которая может быть использована для биодеградации нефти и нефтепродуктов в почвах, пресной и морской воде (Пат. РФ 2312891). Смешанная культура позволяет осущест-