Экстрацеллюларные протеиназы микромицетов с фибринолитическими и антикоагулянтными свойствами

• Автор: Батомункуева, Баирма Пурбодоржиевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 207 с.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Фибринолитическая система организма человека и животных и роль протеина «С» в этой системе
1.2. Тромболитические и фибринолитические средства из
микроорганизмов
1.2.1 Бактерии, синтезирующие ферменты фибринолитического и тромболитического действия
1.2.2. Морские микроорганизмы, синтезирующие протеиназы
тромболитического и фибринолитического действия
1.2.3. Актиномицеты, синтезирующие ферменты
тромболитического и фибринолитического действия
1.2.4. Грибы, синтезирующие ферменты тромболитического и
фибринолитического действия
1.3. Биосинтез микробных прогеиназ, обладающих фибринолигической и антикоагулянтной активностью
1.3.1. Регуляция биосинтеза фибринолитических ферментов
1.3.2. Пути повышения образования протеолитических ферментов микроорганизмами
1.4. Методы выделения протеолитических ферментов
Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Материалы и методы исследования
2.1.1. Объекты исследования и условия их культивирования.

2.1.2. Выделение препаратов протеолитических ферментов
2.1.3. Методы определения концентрации белка
2.1.4. Метод определения фибринолитической активности в тонком слое
2.1.5. Определение казеинолитической активности
2.1.6. Определение антикоагуляптной активности протеолитических ферментов
2.1.7. Определение рН-оптимума и рН-стабильности действия протеолитических ферментов
2.1.8. Определение температурного оптимума и термостабильности действия протеолитических ферментов
2.1.9. Сорбенты, использованные для выделения и очистки протеолитических ферментов
2.1.10. Получение препарата протеиназ методом аффинной хроматографии
2.1.11. Диск-электрофорез белков в полиакриламидном геле
2.1.12. Разделение комплекса протеиназ методом колоночной хроматографии
2.1.13. РЕАХром - Протеин «С» метод определения активности протеина «С» в плазме крови
2.2. Результаты и их обсуждение
2.2.1. Скрининг коллекции микромицетов с целью выявления куль-
тур, продуцирующих прогеиназы с фибринолитическими и антикоагулянтными свойствами
2.2.2. Изучение некоторых физико-химических свойств выделенных протеиназ і рибов Aspergillus ochraceus
и Aspergillus alliaceus 7 dNl

2.2.3. Разделение комплекса протеолитических ферментов
Aspergillus alliacens 7 dN 1 методом колоночной хроматографии с использованием смолы DEAE Toyopearl 650 М
2.2.4. Выделение и очистка протеолитических ферментов Aspergillus ochraceus 513 методом аффинной хроматографии на бациллихин-силохроме
2.2.5. Разделение комплексного препарата протеиназ Aspergillus ochraceus 513 (после аффинной хроматографии) методом
колоночной хроматографии с использованием смолы DEAE Toyopearl 650 М
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

специфичности его протеиназ к фибрину в 10,2 раза. Интересно, что культивирование В. mesentericus и В. subtilis на синтетических средах, а С/, acetobutilicum - на среде неопределенного состава способствует синтезу протеиназ только с фибринолитической активностью, казеинолиз отсутствует полностью. Более того, возникающее при варьировании условий культивирования продуцентов изменение количественного соотношения компонентов образующихся протеолитических комплексов может не только повысить специфичность протеиназ к фибрину, но и снизить чувствительность этих ферментов к ингибиторам плазмы крови человека (Егоров, 1979).
Важным фактором, влияющим на выход тромболитических ферментов, является источник углерода в среде. Так, глюкоза и сахароза ингибируют образование внеклеточной протеиназы у A. oryzae. Замена их на глицерин увеличивает интенсивность процесса на 40 %. При содержании в среде глюкозы свыше 1% снижался синтез внеклеточных ферментов у Mycobacterium lactolum, В. subtilis, В. mesentericus. В этом случае при метаболизме глюкозы происходит образование органических кислот, которые подавляют транспорт индуктора в клетку микроорганизма (Егоров, 1978). Для В. mesentericus показано, что наиболее высокие тромболитическая и казеинолитическая активности на среде с пептоном и картофельным отваром имели место в присутствии лактозы, глюкозы, фруктозы и галактозы. Наименьший эффект наблюдался при добавлении арабинозы или ксилозы. Сорбит, маннит и глицерин значительно увеличивали фибринолитическую активность, но казенно - и тромболитическая активности были невысокими (Имшенецкий, 1986).
В современном производстве продуктов микробного синтеза все большее распространение получают процессы, осуществляемые иммобилизованными клетками микроорганизмов.