Кинетический метод оценки антиоксидантной активности и безреагентный медиаторный биосенсор

• Автор: Вохмянина, Дарья Владимировна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 154 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Модифицированные электроды
1.1. Способы модификации электродов
1.2. Модифицированные электроды для определения пероксида водорода
Глава 2. Антиоксидантная активность
2.1. Антиоксиданты, входящие в состав крови человека
2.1. Методы определения аитиоксидантной активности
Глава 3. Биосенсоры
3.1. Основные определения
3.2. Классификация биосенсоров
Глава 4. Иммобилизация ферментов при конструировании сенсоров

4.1. Использование ионообменных полиэлектролитов для иммобилизации фермента
4.2. Использование сред с высоким содержанием органического растворителя
Глава 5. Экспериментальная часть
5.1. Материалы
5.2. Оборудование
5.3. Методы
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 6. Безреагентный биосенсор на основе глюкозооксидазы и
медиатора, иммобилизованных в мембрану полиэлектролита
6.1. Выбор медиатора

6.2. Гомогенная кинетика взаимодействия азинов с восстановленным активным центром глюкозооксидази
6.3. Иммобилизация азинов в мембраны нафиона методом «вымачивания»
6.4. Формирование мембран нафиона с иммобилизованным азином путем совместного нанесения из раствора
6.5. Совместная иммобилизация азинов и глюкозооксидази для разработки биосенсоров второго поколения
6.6. Выбор потенциала и медиатора для определения глюкозы
6.7. Каталитические свойства ферментного электрода
6.8. Определение глюкозы в проточно-инжекционном режиме биосенсором на основе фенотиазина
6.9. Стабильность глюкозного биосенсора второго поколения на основе фенотиазина
6.10. Определение глюкозы в цельной крови
Глава 7. Конструирование электроанали гической системы для
определения глюкозы в цельной крови
7.1. Оптимизация концентрации ПАВ для гидрофилизации верхнего слоя пластика капилляра
7.2. Электрохимические измерения для биосенсора в системе с капилляром 1
7.3. Определение глюкозы биосенсорами на основе фенотиазина в системе с капилляром
Глава 8. Оценка антиоксидантной активности пищевых продуктов по кинетическим параметрам реакции разложения в них пероксида водорода
8.1. Оценка антиоксидантной активности по кинетическим параметрам реакции разложения пероксида водорода в растворе антиоксидантов
8.2. Оценка антиоксидантной активности в экстрактах

8.4. Выражение антиоксидантной активности через количество эквивалентов тролокса
8.5. Определение антиоксидантной активности методом, основанным на спектрофотометрической регистрации максимума спектра поглощения тиобарбитурат-активных продуктов ПОЛ
8.6. Антиоксидантная активность соков
Глава 9. Оценка антиоксидантной активности сыворо тки крови
9.1. Адаптация условий проведения измерений
9.2. Аналитические характеристики сенсора на пероксид водорода
9.3. Оценка антиоксидантной активности сыворотки крови спортсменов до и после нагрузки по кинетическим параметрам реакции разложения пероксида водорода
Глава 10. Определение антиоксидантной активности в коллоидных
растворах диоксида церия
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

удерживается на поверхности электрода с помощью электростатических, водородных или гидрофобных взаимодействий 1109]. Сами по себе эти взаимодействия слабы, но за счет образования множества таких связей обеспечивается достаточно надежная фиксация фермента на поверхности электрода.
Ковалентная иммобилизация фермента на поверхности электрода позволяет достичь большей стабильности биочувствительного слоя. Для этого используются функциональные группы на поверхности глобулы фермента (аминогруппы, карбоксильные, гидроксильные и имидазольные группы). В ходе иммобилизации не должны затрагиваться те функциональные группы, которые важны для проявления каталитической активности фермента. Поэтому иногда ковалентную модификацию проводят в присутствии субстрата фермента. Однако, несмотря на все меры предосторожности, существует вероятность затрагивания важных для активности фермента групп в ходе ковалентной иммобилизации фермента [110]. Чаще всего для связывания фермента при ковалентной иммобилизации применяют глутаровый альдегид.
Наибольший интерес, с точки зрения сохранения активности фермента, представляет включение фермента в матрицу: гели или полимерные мембраны. Данный способ иммобилизации обладает рядом преимуществ:
• позволяет одновременно включать в мембрану и соответствующие переносчики электронов [111,112];
• матрицы могут устранять мешающее влияние некоторых веществ.
При формировании геля в растворе, содержащем фермент, последний захватывается в образующийся гелевый носитель. Однако этот метод имеет два принципиальных недостатка:
• гель создает большие диффузионные барьеры для субстратов и образующихся продуктов, особенно это существенно для субстратов ферментов с большой молекулярной массой, таких как рибонуклеаза, трипсин;