Усовершенствование технологии изготовления и методов контроля инактивированной вакцины против классической чумы свиней

• Автор: Федоров, Дмитрий Геннадьевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 150 с. : ил.

Оглавление

Оглавление
Оглавление
Список сокращений
1 .Введение
І.Обзор литературы
2.1. Классическая чума свиней и средства профилактики
2.2.Технология выращивания вирусов
2.3.Инактиванты и их характеристики
2.4.Адъюванты и их свойства
2.5.3аключение по обзору литератору
Ъ.Собственные исследования
3.1.Материалы и методы
3.1.1.Материал ы
3.1.1.1.Вирус ы
3.1.1.2.Культуры клеток
ЗЛЛ.З.Среды и растворы
3.1.1.4.Реактив ы
3.1.1.5.Животны е
ЗЛЛ.б.Оборудование
3.1.2.Метод ы
3.1.2.1.Выращивание культур клеток
3.1.2.2.0бработка сыворотки крупного рогатого
скота ПЭГ
3.1.2.3.Выращивание вируса КЧС в культуре клеток
3.1.2.4.0пределение инфекционной активности вируса
3.1.2.5.Концентрирование вируса
3.1.2.6.Инактивация вируса КЧС
3.1.2.7.0пределение полноты инактивации вируса
3.1.2.8.Выделение РНК
3.1.2.9.Синтез кДНК
3.1.2.10.Постановка ПЦР
Оглавление
3.1.2.11.Рестрикционный анализ
ЗЛ.2.12.Приготовление инактивированной вакцины
3.1.2.13.0ценка иммуногенности вакцины
3.1.2.14.Статистическая обработка результатов
исследований
Ъ.2.Результаты собственных исследований
3.2.1.Усовершенствование технологии получения вирусного сырья
3.2.1.1.Выбор клеточной системы и штамма
вируса КЧС
3.2.1.2.Условия выращивания вируса
3.2.1.2.1 .Время культивирования
3.2.1.2.2.Сыворотка крови различных видов животных
3.2.1.2.3.Метод культивирования
3.2.1.3.Генетическая стабильность штамма вируса
3.2.2.Усовершенствование технологии изготовления инактивированной вакцины
3.2.2.1 .Концентрирование вируса
3.2.2.2.Условия хранения вирусного сырья
3.2.2.3.Кинетика инактивации вируса
3.2.2.4.Выбор адъюванта
3.2.2.5. Условия хранения вакцины
3.2.3.Усовершенствование методов иммунобиологического контроля вакцины
3.2.3.Юценка полноты инактивации вируса
3.2.3.1.1 .Биологическим методом
3.2.3.1.2.Методом ПЦР
З.2.З.2. Оценка иммуногенности вакцины
3.2.3.2.1.Изучение иммуногенности вакцины на свиньях
3.2.3.2.2.Оценка иммуногенности вакцины на кроликах
Оглавление

3.2.4.Разработка условий применения вакцины
3.2.4.1.Доза и кратность применения
3.2.4.2.Длительность иммунитета
3.2.4.3.Влияние пассивного иммунитета
на поствакцинальный
3.2.4.4.Иммунологическая реактивность животных на введение антигена
3.2.5.Рценка вакцины в производственных условиях
4. Обсуждение результатов исследований
Выводы
Практические предложения
Список использованной литературы
Приложения
Обзор литературы

минантов (75).
В настоящее время в различных известных культурах клеток, полученных от млекопитающих и птиц более-менее регулярно обнаруживается более 30 контаминантов вирусной природы. Это затрудняет их использование как в биологической промышленности, так и научно-исследовательских целях.
При производстве вирусвакцин на основе персистентно инфицированных культур клеток существует постоянная потенциальная опасность взаимодействия экзогенного вируса с вирусом-контаминантом (интерференция, экзальтация, гибридизация) с непредсказуемым конечным результатом. Другой отрицательный момент этого явления - возможное иммунодепрессивное действие вируса-контаминанта при иммунизации контаминированными вакцинами (84).
В настоящее время не найдено универсального метода деконтаминации клеточных культур от персистирующих в них вирусов. Наиболее распространенные из них: длительное пассирование в среде со специфическими антителами, использование химиотерапевтических препаратов, культивирование хронически инфицированных культур в присутствии антивирусной сыворотки (3, 6, 7, 85, 120). Полное освобождение перевиваемых культур клеток от персистирующих вирусов возможно лишь на основании тщательного изучения свойств контаминированной клеточной линии, свойств вирусов-контаминан-тов, знание которых позволяет разработать эффективную схему деконтаминации перевиваемых культур от контаминирующих агентов.При наличии большого числа перевиваемых линий, адаптированных к различным методам культивирования, чувствительность клеток к конкретному вирусу определяет выбор клеточной системы в биотехнологии препаратов. Под чувствительностью клеток к вирусу понимают совокупность фенотипических и генотипических характеристик клеток, обеспечивающих прикрепление и проникновение вируса в клетки, а также продолжительность репродукции вируса в клетках (50, 53, 64).