Применение УФ-спектрофотометрии для идентификации и дифференциации микроорганизмов рода Сorynebacterium

• Автор: Новаковский, Андрей Станиславович
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Омск
• Количество страниц: 146 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР . ШТЕРАТУРЫ
1.1 Идентификация микроорганизмов рода СогупеЬа<Чегшт
1.2 Фенотипические свойства
1.2.1 Морфологические свойства
1.2.2 Тинкториальные свойства
1.2.3 Культуральные свойства
1.2.4 Биохимические свойства
1.2.5 Патогенные и вирулентные свойства
1.3 Генотипические свойства
1.4 Современные физико-химические методы биодетекции
и идентификации микроорганизмов
1.5 Использование метода спектрофотометрии для исследования биообъектов и диагностики болезней животных
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы
2.1.1 Методологические подходы использования спектрофотометрии для идентификации и дифференциации микроорганизмов рода СогуиеЬаЫепит
2.1.2 Приборное, лабораторное и программное обеспечение
постановки опытов
2.1.3 Использование методик аппроксимации и многомерной линейной регрессии для дополнительной обработки спектров поглощения
корннебактерий, полученных с помощью УФ-спектрофотометрии
2.2 Результаты исследований
2.2.1 Изучение фенотипических свойств рода СогупеЬас1епит
2.2.1.1 Изучение морфологических свойств
2.2.1.2 Изучение культуральных свойств
2.2.1.3 Изучение биохимических свойств
2.2.1.4 Изучение свойств культур С. рвенсІоиіЬегсиІоьіз после долговременного хранения в лиофилизированном состоянии
2.2.2 Определение устойчивости различных фенотипических форм
С. рзеисІоІиЬегсиїозіз к у-излучению
2.2.3 Идентификация и дифференциация микроорганизмов
методом УФ-спектрофотометрии
2.2.3.1 Таксономия штаммов С.рзеийоШЬегсиІозіз по спектральным характеристикам
2.2.3.2 Статистическая обработка экспериментальных
данных УФ-спектрофотометрии
2.2.3.3 Анализ спектральных характеристик исследуемых микроорганизмов с помощью методики аппроксимации
2.2.3.4 Использование комплексных критериев для оценки родовой и видовой принадлежности образцов исследуемых микроорганизмов
2.2.3.5 Определение молярного процента гуанина цитозина по спектральным характеристикам и фенотипическим свойствам
штаммов С .pseudotiibefci.ilозіз
3 ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Накопленный опыт в исследованиях кори-небактериозов предоставляет все больше данных о значительной роли ко-ринебактерий в инфекционных патологиях животных. Corynebacterium pseudotuberculosis вызывает у животных хронически протекающую болезнь - казеозный лимфаденит. В последние годы появились факты, свидетельствующие о том, что данный микроорганизм обладает особым циклом развития и отличается от большинства микроорганизмов возможностью приспосабливаться к внутриклеточным условиям паразитирования. Казеозный лимфаденит широко распространен в странах с развитым овцеводством: Австралии, Новой Зеландии, США, Индии, Аргентине, Румынии, России [H.R. Carne (1932); H R.Carne, С. Cramp (1 932); C.V. Dayus, S.M. Hopkirk (1932); К.T. Maddy (1953); К.Ф. Ламихов (1954); М.М. Халимбеков и др. (1961), C.Benham, A. Seman, М. Woodbim (1962); М.М. Далгат (1962, 1965); Э.А. Шегедевич (1968, 1969); A.J. Husband, D.L Watson (1977); И.Д. Головко, И.Г. Трофимов (1979); И.Г. Трофимов (1981, 1984, 1988, 1990, 1993, 1994); Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов (1993); М.В. Заболотных (1989, 1999); М.В. Заболотных., А С. Крупко (1999)].
Коринебактерии представляют потенциальную угрозу здоровью не только животных, но и человека, так как не исключено заболевание людей в результате их контакта с животными, пораженными данным микроорганизмом.
Вплоть до настоящего времени, несмотря на длительный период изучения данного микроорганизма, нет достаточно надежных прижизненных методов диагностики и мер специфической профилактики вышеназванной болезни. Поиск методов диагностики осложняется недостатком знаний, об этиологии данной инфекции. Это обусловлено тем, что С. pseudotuberculosis отличается широ-

рой группы животных отмечалась сильная реакция только в месте введения культуры.
Таким образом, изучение только фенотипических свойств С. рэеис1о1:11Ьегс111о818 не дает нам полной картины о свойствах данного микроорганизма, поэтому необходимо рассмотреть его генотипические характеристики.
1.3 Генотипические свойства
С развитием молекулярной биологии появились возможности новых подходов к характеристике организмов, что оказало глубокое воздействие на систематику бактерий.
Изучение нуклеиновых кислот является одним из направлений в молекулярной биологии. Знания молекулярных характеристик нуклеиновых кислот позволяет создать наиболее унифицированную систему классификации бактерий. Осознание преимущества классификации бактерий по признакам молекулярных характеристик ДНК исходит из того, что в молекуле ДНК заложена информация о структурных и энзиматических белках организма, определяющих фенотип последнего. Поэтому изучение только одной молекулы позволяет познать свойства, характеризующие организм вцелом.
Процесс изучения нуклеиновых кислот, и в первую очередь ДНК, с целью классификации организмов получил название “геносистематика”. Основными признаками геносистематики является нуклеотидный состав и уровень гомологии нуклеотидных последовательностей.
Нуклеотидный состав или молярный процент содержания гуанина и цитозина (мол.% ГЦ) явился первой характеристикой ДНК, успешно применяемой в таксономических целях. Значение мол%ГЦ у различных бактерий варьирует в достаточно широком