ПЦР-диагностика контаминации пищевых продуктов бактериями рода Campylobacter и кампилобактериоза у людей

• Автор: Булахов, Антон Валерьевич
• Шифр специальности: 14.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Биологические характеристики, резервуары и источники, патогенность возбудителей кампилобактериоза, влияние различных факторов на их поведение и свойства
1.1.1. Таксономия, морфология, физиология
1.1.2. Источники и резервуары
1.1.3. Антигенная структура и патогенные свойства
1.1.4. Устойчивость к антибиотикам
1.1.5. Способность к некупътурабепыюму состоянию
1.1.6. Устойчивость к условиям окружающей среды
1.2. Вирулентность термофильных кампилобактерий, клинические
проявления пищевого кампилобактериоза и их последствия
1.3 Роль пищевых продуктов в заболеваемости населения инфекциями кампилобактериозной природы. Меры снижения риска
распространения возбудителя в пищевой цепи
1.4. Современное состояние методической базы для оценки загрязнённости пищевых продуктов термофильными кампилобактериями и лабораторной диагностики кампилобактериоза
1.4.1. Культуральные методы выделения и идентификации термофильных кампилобактерий (ТК)
1.4.2. Альтернативные быстрые методы определения
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы исследования
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Адаптация метода ПЦР в реальном времени с гибридизационно-флюоресцентной детекцией для определения термофильных кампилобактерий в пищевых продуктах и биоматериале от больных
кампилобактериозом
2.2.1.1. Выбор метода исследования
2.2.1.2. Изучение влияния субстрата и способа экстракции ДНК на
эффективность ПЦР-РВ
2.2.1.3 Оптимизация метода ПЦР-ФЗ для анализа пищевых продуктов контаминированных посторонней микрофлорой
2.2.1.4. Оценка влияния способа экстракции нуклеиновых кислот на выявление ТКБ
2.2.1.5. Оценка жизнеспособности культуры при помощи ПЦР-РВ
2.2.1.6. Оценка эффективности выбранного метода ПЦР-ФЗ в сравнении с традиционным методом бактериологического посева
2.2.1.7. Схема выявления кампилобактерий в пищевых продуктах и биоматериале от больных
2.2.2. Оценка загрязнённости кампилобактериями пищевых продуктов методом ПЦР-ФЗ
2.2.2.1. Оценка загрязнённости кампилобактериями различных видов пищевых продуктов
2.2.2.2. Количественная оценка загрязнения тушек кур, смывов с них и субпродуктов методом ПЦР-ФЗ
2.2.2.3. Изучение влияния различных технологий охлаждения битой птицы на показатели загрязнения кампилобактериями
2.2.3. Лабораторная диагностика наличия термофильных кампилобактерий в биоматериале от больных острым кампилобактериозом и от лиц с синдромом раздражённого кишечника с использованием метода ПЦР-ФЗ
2.2.3.1. Диагностика кампилобактериоза у больных ОКИ с использованием метода ПЦР-ФЗ
2.2.3.2. Обнаружение кампилобактерий в стуле пациентов с синдромом
раздраженного кишечника
2.2.3.3. Обнаружение и характеризация сопутствующей микрофлоры в стуле пациентов с синдромом раздраженного кишечника
2.2.3.4. Генетические детерминанты факторов патогенности у штаммов кампилобактерий, выделенных из пищевых продуктов и от больных кампилобактериозом
3.ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

происходит перекрёстная контаминация тушек, в первую очередь охлаждение битой птицы.
Эксперты ЕС также высказываются за принятие строгих мер биобезопасности в первичном звене сельскохозяйственного производства. В исследовании, проведённом EFSA, установлено, что вероятность производства контаминированной тушки выше в 30 раз, если куры получены из инфицированного стада. В этом случае также выше и уровень содержания ТК, чем у кур, перекрестно контаминированных в процессе переработки. Однако, как вероятность выпуска контаминированной курятины, так и количественные показатели содержания ТК сильно варьируются между предприятиями [EFSA Journal, 2010 (b)].
Соответственно, не подлежит сомнению, что в глобальном плане стратегия минимизации заболеваемости кампилобактериозом и его последствий должна заключаться в принятии мер в основном источнике данного патогена - в звене первичного производства и переработки птицы для сокращения пропорции заражённой ТК птицы и снижения численности этих микробов на тушках [Гущин В.В., с соавт., 2009].
Как предлагают ведущие специалисты в ЕС, наряду с разработкой новых надёжных технологий, необходимы и новые меры управления и контроля рисков на производстве. Например, вместо установления нормативов по патогенам и, соответственно, испытаний их отсутствия в сырьевой продукции, - использование критериев эффективности принимаемых ветеринарных и санитарных мер в виде. Комиссия экспертов направила для рассмотрения в EFSA проекты микробиологических критериев для Campylobacter spp., эти критерии установлены для 3-х видов продукции (тушки птицы, молоко сырое, живые двустворчатые моллюски) на различных стадиях их производственного процесса, с тем расчётом, что на этапе нахождения этой продукции на рынке будет обеспечен должный уровень безопасности потребителей. В настоящее время идёт процесс обсуждения с