Влияние гипогликемии на состояние энергетического и азотистого обмена в печени крыс с экспериментальным сахарным диабетом

• Автор: Медведева, Наталия Борисовна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Ярославль
• Количество страниц: 151 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Гипогликемия: распространенность, симптоматика и нарушения
физиологических функций
1.2. Особенности метаболизма углеводов и липидов в печени
1.3. Азотистый метаболизм в печени
1.4. Механизмы цитотоксичности аллоксана и использование модели
аллоксанового сахарного диабета
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация и условия проведения эксперимента
2.2. Методы исследования
2.2.1. Определение количества субстратов
2.2.2. Определение активности ферментов
2.3. Статистическая обработка результатов
Глава 3. ИЗМЕНЕНИЯ УРОВНЯ СУБСТРАТОВ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО И АЗОТИСТОГО ОБМЕНА
3.1. Изменения уровня субстратов энергетического обмена
3.1.1. Изменения концентрации глюкозы в крови
3.1.2. Изменения концентрации лактата в сыворотке крови
3.1.3. Изменения концентрации СЖК в сыворотке крови
3.1.4. Изменения концентрации кетоновых тел в сыворотке крови
3.1.5. Изменения концентрации гликогена печени
3.2. Изменения уровня субстратов азотистого обмена
3.2.1. Изменения концентрации мочевины в сыворотке крови
3.2.2. Изменения концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови
3.2.3. Изменения концентрации аминоазота в сыворотке крови
Глава 4. АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ОБМЕНА В ПЕЧЕНИ
4.1. Дихотомический распад углеводов
4.2. Активность лактатдегидрогеназы
4.3. Активность цитоплазматических НАДФ-зависимых ферментов
4.4. Активность ферментов цикла трикарбоновых кислот
Глава 5. АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА
В ПЕЧЕНИ
5.1. Активность аминотрансфераз
5.2. Активность глутаматдегидрогеназы
5.3. Активность аденозинмонофосфатдезаминазы
5.4. Активность глутаминазы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений
АДФ - аденозиндифосфат
АлАТ - аланинаминотрансфераза
АМФ - аденозинмонофосфат
АсАТ - аспартатаминотрансфераза
АТФ - аденозинтрифосфат
НАД - никотинамидадениндинуклеотид
НАДН2 - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид фосфат
НАДФН2 - никотинамидадениндинуклеотид фосфат восстановленный
СЖК - свободные жирные кислоты
ТХУ - трихлоруксусная кислота
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота, динатриевая соль

на 1 мл пробы. Общий объем пробы - 2.5 мл. Содержание белка супернатанта в пробе - 2-3 мг. Время инкубации - 30 мин при 37° С (Панин и соавт., 1982). Количество лактата определяли энзиматически (Прохорова, 1982). Интенсивность гликолиза и гликогенолиза выражали в нмоль лактата' мин_1 ’мг белка
Активность лактатдегидрогеназы (КФ 1.1.1.27) определяли по реакции восстановления пирувата в инкубационной среде, содержащей 0.154 М КС1, 0.05 М трис-НС1 (pH 7.6), 9.0 мМ НАДН, 0.3 мМ пирувата натрия. После преинкубации гомогената в указанной среде реакцию начинали добавлением субстрата (Прохорова, 1982). Активность фермента выражали в нмоль мин ' 1 мг белка"’).
При определении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (КФ 1.1.1.49) среда инкубации включала 0.025 М трис-НС1- буфер, pH 7.6, 0,025 М ]ф*С12, 210'3 М глюкозо-6-фосфат, ПО"3 М НАДФ и 0.2-0.4 мг белка цитоплазматической фракции. Глутатионредуктазную активность (КФ 1.6.4.2) исследовали в среде, содержащей 0.067 М фосфатный буфер, pH 6.6,
7.5 мМ окисленного глутатиона, 6.0 мМ НАДФН2 и 0.1-0.2 мг белка цитоплазматической фракции (Прохорова, 1982). Активность НАДФ-зависимых дегидрогеназ выражали в нмоль мин мг белка
Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ, КФ 1.3.99.1) определяли с использованием 2,6-дихлорфенолиндофенола в качестве акцептора электронов (Кривченкова, 1977). Инкубационная среда в конечном объеме
4.0 мл содержала 0.1 М К- Иа- фосфатного буфера, pH 7.4, 0.2 мл 0.02 М раствора феназинметосульфата, 0.2 мл 0.001 М раствора 2,6
дихлорфенолиндофенола, 0.2 мл 0.05 М раствора цианида натрия и 0.2 мл
0.05 М раствора сукцината натрия. Коэффициент молярной экстинкции 2,6-дихлорфенолиндофенола при длине волны 600 нм принимали равным 20 000 М"1' см’1 (Досон и соавт., 1991). Активность фермента выражали в мкмоль мин 4 г ткани “1.