Иммуно-физиологический статус у рыб из природных популяций и аквакультуры в норме и при патологии

• Автор: Маклакова, Мария Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.02.06, 03.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 с. : ил.

1. Обзор литературы
Современные представления об иммунной системе рыб
Бактериальные инфекции
Вирусные инфекции
Инвазии
Антибиотики и их влияние на иммуно-физиологическое состояние рыб
Хемосенсорньте свойства различных веществ для рыб
2. Материалы и методы
2.1. Объекты
2.2. Методы
2.2.1. Гематологический анализ
2.2.2. Клинический осмотр рыб и патологоанатомическое исследование
2.2.3. Бактериологическое исследование
2.2.4. Вирусологическое исследование
2.2.5. Паразитологическое исследование
2.2.6. Электрофоретическое исследование сыворотки крови
2.2.7. Введение антибиотиков
2.2.8. Электронная микроскопия
2.2.9. Исследование вкусовой привлекательности гранул с антибиотиками
2.2.10. Статистический анализ результатов
3. Результаты
3.1. Исследование иммуно-физиологического статуса трески и наваги
3.2. Исследование иммуно-физиологического статуса карпа при бактериальной и
вирусной инфекциях
Морфогенез БУСУ
Ультраструктура и строение вириона БУСУ
3.3. Влияние антибиотиков на иммунофизиологический статус радужной форели
3.4. Оценка вкусовой привлекательности антибиотиков
4. Обсуждение результатов
4.1. Исследование иммуно-физиологического статуса трески и наваги
4.2. Исследование иммуно-физиологического статуса карпа при бактериальной и
вирусной инфекциях
4.3. Воздействие инъекций антибиотиков на иммуно-физиологический статус форели
4.4. Оценка вкусовой привлекательности антибиотиков для радужной форели
Заключение
Выводы
Список литературы
Список сокращений
ДИ-частицы - делеционные мутанты вируса 8УСУ.
ЕРС - перевиваемая культура клеток из эпителиальной папилломы карпа.
ЖКТ — желудочно-кишечный тракт.
М - матриксный белок вириона 8VСУ.
МПА — мясопептонный агар.
МПБ — мясопептонный бульон.
ПСА - персульфат аммония.
с/х животные - сельскохозяйственные животные.
Список МЭБ - заразные (трансмиссивные) болезни, которые имеют способность к опасному и быстрому распространению безотносительно к государственным границам, сопровождаются серьезными последствиями в области общественной экономики и здравоохранения, имеют важное значение в международной торговле животными и продуктами животноводства.
ТЕМЭД - N,N,N’,14’ - тетраметилэтилендиамин.
тцд - титр вируса, количество вируса, которое вызывает ЦПД в 50% зараженных лунок с культурой клеток.
ЦПД - цитопатогенное действие вируса.
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота.
(-) звЯКА - минус-цепь вирусная РНК.
(+) збШЧА - плюс-цепь вирусная РНК Р-МЭ - р-меркаптоэтанол.
ЕШМА - диметилбензиламин.
ИББА - додецилянтарный ангидрид. сПОИА - двуцепочечная вирусная ДНК.
О - гликопротеин оболочки вириона 8УСУ
IHNV - вирус некроза гематопоэтической ткани лососевых.
1 - длина тела до конца чешуйного покрова.
N, NS, L - белки нуклеокапсида вириона SVCV.
SDS - додецилсульфат натрия.
SVCY - вирус весенней виремии карпов.
TL - максимальная длина.
TTSS - Type three secretion system, система белков грамотрицательных бактерий, увеличивающая их патогенность.
VHSV - вирус геморрагической септицемии лососевых.
YSV - вирус везикулярного стоматита.

Фиксация материала. Зараженный материал собрали в 2 флакона, контрольный материал - в один флакон емкостью 50 мл. Центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин. Промывали осадок однократно №-какодилатным буфером pH 7,2. Во флакон с осадком добавили фиксатор 1 (1,5% раствор глутаральдегида в 0,1 М Ыа-какодилатном буфере), инкубировали в течение 2 часов при 4° С. Затем спустя 2 часа удалили осторожно фиксатор и добавили вторую порцию, оставили на 15 минут при 4°С. Центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин. Из трех флаконов поочередно удалили надосадочную жидкость. К осадку добавили немного фиксатора 1. Ресуспендировали и разделили по трем микропробиркам. Центрифугировали при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость удалили. В микропробирки добавили фиксатор 2 (1% раствор Дальтона). Состав: 2 части - ОьСД 2% (в 50т1 дистиллированной воды, 37°), 1 часть - К2Сг207 7%, 1 часть - ЫаС1 3,4% так, чтобы закрыть материал и оставили на 1 час при комнатной температуре. Отцентрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, удалили надосадочную жидкость. Добавили фиксатор 3 (раствор уранил ацетата и сахарозы в дистиллированной воде: 1 часть -уранил ацетат 1%, 1 часть - сахароза 1,08%) и оставили при комнатной температуре на 30 мин. Центрифугировали при 3000 об/мин 10 мин. Удалили надосадочную жидкость.
Обезвоживание проводили в спиртах восходящей концентрации: 30%, 50%, 70%, 80%, 96%. В каждом спирте инкубировали 30 минут. Между сменами спиртов центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. В 70% спирте оставили на ночь. Затем перенесли материал в новые пробирки. Окончательное обезвоживание проводили абсолютным ацетоном два раза по 15 минут с закрытой крышкой.
Заливка: Залили смесью ацетона и смолы (1:1) , оставили на 1 час (Состав смолы: Еропаїе - 8,3 мл, АгаМйе - 5,0 мл, БОБА - 20,0 мл, ВБМА
1,0 мл - отвердитель). Затем содержимое каждой микропробирки разделили между двумя капсулами. После центрифугирования добавили смолу так,