Технология изготовления и свойства питательной среды сухой стерильной на основе гидролизатов

• Автор: Богрянцева, Марина Поликарповна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 190 с. : ил.

Содержание
1. Введение
2. Обзор литературы
2.1. Питательные среды в клеточной биотехнологии
2.1.1. Назначение, классификация и общие требования к вирусологическим
питательным средам
2.1.2. Применение гидролизатных питательных сред в вирусологической
практике
2.2. Особенности технологии изготовления и стерилизации сухих форм
вирусологических питательных сред
2.3. Методы контроля качеству Вирусологических питательных сред
2.4. Заключение
3. Материалы и методы
4. Результаты исследований
4.1. Разработка технологии изготовления сухой формы питательной среды на
основе гидролизатов
4.1.1. Сравнительное изучение свойств сухой и жидкой форм вирусологических питательных сред
4.1.2. Сравнительное изучение физико-химических и ростобеспечивающих свойств ферментативных гидролизатов
4.1.3. Некоторые особенности технологии изготовления сухой формы вирусологических питательных сред на основе гидролизатов
4.2. Разработка метода радиационной стерилизации сухих питательных сред на

основе гидролизатов
4.3. Сравнительное изучение методов контроля сухих стерильных питательных
сред на основе гидролизатов
4.3.1. Физические, физико-химические и химические методы анализа сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов
4.3.2. Биологические методы контроля сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов
4.3.3. Разработка спектрофотометрического экспресс-метода анализа питательных сред
4.4. Изучение сроков хранения сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов
4.5. Эффективность применения сухих стерильных питательных сред на основе ферментативных гидролизатов в вирусологической практике
4.5.1. Применение сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов для получения первичных культур клеток
4.5.2. Использование сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов для серийного пассирования перевиваемых линий клеток
4.5.3. Использование сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов для конструирования малосывороточных и бессывороточных питательных сред
4.5.4. Изучение чувствительности культур клеток, выращенных с использованием сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов, к некоторым вирусам
4.6. Апробация сухих стерильных питательных сред на основе гидролизатов в производстве культур клеток и противовирусных препаратов

4.7. Опытно-промышленное производство сухих стерильных питательных сред
на основе ферментативных гидролизатов
4.8. Технико-экономическое обоснование производства сухих стерильных
питательных сред на основе гидролизатов
5. Обсуждение результатов
6. Выводы
7. Практические предложения
8. Список литературы
9. Приложения
Так, метод, основанный на включении в ПС меченных предшественников синтеза ДНК (3Н-метилтимидина), позволяет через 1 сутки сделать заключение о качестве ПС. Чем ниже будет уровень включения меченого тимидина в клетки, культивируемые в исследуемой среде, по сравнению с аналогичным показателем для стандартной среды, тем ниже будет и ростовая активность испытуемой среды [11]. Для оценки биологических свойств гидролизатных сред, а также сывороток предлагается метод [74], основанный на принципе, согласно которому физиологические требования культур клеток к качеству ПС возрастают с уменьшением их посевного материала. В качестве тест-культуры в данном случае используют первичные культуры клеток ФЭК или ФЭП в различных посадочных концентрациях: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 и 0,6 млн/мл. Из каждого образца суспензии клеток выращивают стационарно, без смены среды, по 4 пробирочных культуры. Таким образом контроль каждой серии среды проводится на 24 пробирках. При этом ростовые свойства ПС оценивают в баллах ежедневно в течение 7 суток наблюдения, путем микроскопирования образцов пробирочных культур в сравнении с контролем. В 1, 2, 3 и 4 балла оценивают пробирочные культуры имеющие соответственно 25, 50, 75 и 100% монослоя. Общая сумма баллов при всех посадочных концентрациях культуры клеток указывает на уровень ростовой активности ПС или сыворотки. Преимущество данного метода в том, что он позволяет количественно оценивать не только качество анализируемых ПС и сывороток, но и улавливать влияние отдельных изменений технологического процесса изготовления ПС и степень очистки компонентов.
Заслуживает интерес и количественный метод контроля, основанный на экспериментально обнаруженной зависимости между уровнем карбонильных соединений, накапливаемых в надклеточной жидкости в течение первого пассажа и ростовыми характеристиками исследуемых сред [105]. Предложенный индекс (Икс), характеризует изменения уровня карбонильных соединений под влиянием одной клетки и позволяет по