Функциональная активность нейтрофилов ротовой полости человека

• Автор: Ашкинази, Владимир Израильевич
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Индикаторное значение фагоцитарных реакций
1.2. Особенности функциональной активности нейтрофи-
лов, полученных из очагов воспаления
1.3. Функциональное состояние нейтрофилов ротовой полости
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ
РОТОВОЙ ПОЛОСТИ ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ
3.1. Адгезивные реакции
3.2. Кислородзависимый метаболизм
3.2.1. НСТ-тест
3.2.2. Люминолзависимая хемилюминесценция
3.3. Цитохимические реакции
4. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ
4.1. Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки
4.2. Острый гнойный гайморит
4.3. Бронхиальная астма
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Изучение реактивности фагоцитов представляет интерес с нескольких точек зрения. Во - первых, фагоцитоз является базисным механизмом иммунитета и его ослабление снижает резистентность к инфекционным агентам, приводя к тяжелым осложнениям. Во - вторых, подвергаясь гиперактивации в зонах воспаления, фагоциты становятся опасными для хозяина, включаясь в патогенез флогогенных осложнений. Наконец , фагоциты (прежде всего нейтрофилы ) как высокореакгивная категория клеток, служат чувствительным индикатором различных нарушений гомеостаза, что давно используется в качестве диагностического и прогностического критерия в клинической практике [ 67, 73 ]. С этой целью предложено использовать, основанные на функциональном зондировании нейтрофилов ( НГ ), специальные аналитические приемы, которые позволяют выявить такие изменения в организме, которые не регистрируются обычными гематологическими методами. В частности, большой интерес вызывает цитохимическая маркировка нейтро-фильных гранулоцитов. Это связано с доступностью и чувствительностью подобных реакций, когда результаты оценивают на уровне клеток. Нейтро-фил выступает здесь исключительно как мишень, воспринимающая нарушения гомеостаза и здоровья в целом, то есть речь идет о реактивных изменениях клеток, которые возникли в организме, указывают на неблагополучие в нем, и с этой точки зрения, имеют практический интерес [ 70 ]. При помощи цитохимических реакций метят многие метаболитические пути, ферментные и неферментные компоненты нейтрофилов. Чаще всего определяют щелочную и кислую фосфатазу, миелопероксидазу, катионные белки, активные формы кислорода. Значительный интерес представляет изучение фагоцитарного статуса с помощью реактивной хемилюминесценции ( ХЛ ) - высокочувствительного метода, позволяющего выявить реактивность нейтрофилов, которая сопутствует многим заболеваниям и очевидно отражает адекватность функционального напряжения гомеостатических механизмов на

фоне воспалительных процессов. Все сказанное в первую очередь относится к нейтрофильным гранулоцитам крови. Вместе с тем, все более пристальное внимание уделяется изучению местных защитных реакций, что позволяет судить о механизмах формирования органной патологии [ 3, 4, 17, 30, 51, 88, 104, 134, 135 ].
В условиях организма происходит непрерывный процесс эмиграции лейкоцитов из крови в ротовую полость [ 126, 127 ]. Установлено, что 95 - 97 % мигрирующих лейкоцитов составляют нейтрофильные гранулоциты [ 98, 100, 176 ]. Исследованы средние колебания числа лейкоцитов в полости рта здоровых лиц ; показано, что при воспалительных заболеваниях число оральных лейкоцитов увеличивается, а процент жизнеспособных клеток снижается [ 31, 54, 75 ]. Предложен тест для специфической диагностики лекарственной аллергии, основанный на торможении естественной эмиграции лейкоцитов в ротовую полость [ 2 ].
Сведения о функциональной активности нейтрофилов ротовой полости немногочисленны. Имеются данные о более высоком уровне СЗ и IgG- зависимого розеткообразования оральных нейтрофилов по сравнению с нейт-рофилами крови [ 184 ]. Зарегистрировано ослабление адгезии оральных нейтрофилов на стекле [ 137 ]. Показано наличие у нейтрофилов ротовой полости рецепторов к эритроцитам барана, мыши и клеткам пекарских дрожжей [ 97, 98]. Ashkenazy М. et al. [130, 131 ] наблюдали более интенсивное связывание оральными нейтрофилами анти - CR3 антител и противоположную картину для анти- Fc R III. Весьма противоречивы данные касающиеся одного из ключевых механизмов фагоцитоза - респираторного взрыва. Так Yamamoto М. et al. [ 200 ] сообщили о повышенной по сравнению с клетками крови продукции супероксидного радикала оральными нейтрофилами. Однако в более поздней публикации тех же авторов [ 201] приводятся прямо противоположные данные. Обращает на себя внимание, практически полное отсутствие работ по цитохимии оральных нейтрофилов. Можно сослаться лишь на публикации [ 6, 25, 26, 28 ], где изучались нейтро-

рошка три (оксиметил)-аминометана (трис) (НПО “ Биохимреактив”, Россия) растворяли в 50 мл метилового спирта и к полученному раствору добавляли
47,3 мл дистиллированной воды и 2,75 мл 1н. соляной кислоты, которую готовили из фиксонала. В приготовленном метаноловом трис-буфере растворяли 100 мг сухого прочного зеленого ( Sigma, США ), и получали 0,1% раствор прочного зеленого в 50% метиловом спирте, забуференном до pH 8,1-8,2.
При значениях pH 8,1- 8,2 катионные белки являются единственными биополимероми, с которым молекулы красителя реагируют с образованием прочных ионных связей; отсюда необходимость точного определения pH красителя. Приготовленный указанным способом забуференный спиртовой раствор прочного зеленого удерживает постоянную величину pH в процессе длительного хранения ( не менее 1 года) и при окрашивании больших серий препаратов ( не менее 1000 стекол в объеме 100 мл красителя ).
Приготовление водного раствора ядерного красителя
Растворяли 250 мг сухого азура A (Serva, США ) в 100мл дистиллированной воды и получали 0,025% водный раствор азура А. В случае необходимости pH водного раствора доводили с помощью трис до 7,0- 7,2.
Порядок проведения реакции
Тонкие, равномерные мазки крови и взвеси оральных нейтрофилов высушивали на воздухе, и погружали на 20 мин в забуференный спиртовой раствор прочного зеленого ( pH 8,1- 8,2 ). Затем препараты быстро ополаскивали дистиллированной водой и переносили на 15-20 сек в раствор азура А. Краситель смывали проточной водой и высушивали мазки на воздухе. Окрашенный препарат оценивали с помощью иммерсионной микроскопии. Катионные гранулы нейтрофильных гранулоцитов окрашивались в зеленый цвет, а клеточные ядра - в фиолетовый.
Количественная оценка результатов
Для оценки результатов исследования, в соответствии с принципом Kaplow L. [ 160 ] определяли содержание катионных белков, путем расчета среднего цитохимического коэффициента ( СЦК ) по формуле: