Разработка эффективной системы генетической трансформации льна-долгунца (Linum usitatissimum L. ) и дикорастущих видов рода Linum

• Автор: Каляева, Марина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 145 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Генетическая трансформация растений
1.2. Краткая характеристика природных векторных систем
1.2.1. «Генетическая колонизация»
1.2.2. Структурно-функциональная организация Ti-плазмид
1.2.3. Ri-плазмиды Agrobacterium rhizogenes
1.2.4. Векторы на основе вирусов растений
1.2.5. Применение природных векторных систем в генетической инженерии
растений
1.3. Методы трансформации растений Ti (Ю)-плазмидами
1.3.1. Методы инокуляции
1.3.2. Методы кокультивирования
1.4. Методы прямого переноса ДНК в растения
1.4.1. Химические стимуляторы
1.4.2. Элекгропорирование
1.4.3. Микроинъекции ДНК
1.4.4. Инъекции ДНК в молодые цветоносные побеги
1.4.5. Инкубация пыльцы в растворах ДНК
1.4.6. Введение ДНК в прорастающие пыльцевые трубки
1.4.7. Перенос ДНК посредством липосом
1.4.8. Электрофорез

1.4.9. Баллистический метод
1.4.10. Поглощение ДНК семенами
1.5. Анализ методов генетической трансформации растений
1.6. Анализ экспрессии чужеродных генов в трансгенных растениях
1.7. Проблемы и задачи генетической трансформации сельскохозяйственных
растений
1.8. Регенерация и агробактериальная трансформация льна культурного
(Linum usitatissimum L.)
1.8.1. Биология объекта
1.8.2. Культура in vitro льна обыкновенного (Linum usitatissimum L.).
Регенерация растений из соматических тканей
1.8.3. Агробактериальная трансформация льна культурного
1.8.4. Регенерация и агробактериальная трансформация растений льна-долгунца
1.9. Дикорастущие виды рода Linum в кульуре in vitro
1.9.1. Регенерация и агробактериальная трансформация льна крупноцветкового
(Linum grandiflorum Desf.) и льна многолетнего (Linum perenne L.)
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
МАТЕРИАЛЫ
2.1. Оборудование
2.2. Реактивы и ферменты
2.3. Объекты исследования
2.4. Среды
2.4.1. Микробиологические среды
2.4.2. Среды для культивирования растений

2.5. Другие растворы
2.6. Бактериальные штаммы и плазмиды
МЕТОДЫ
2.7. Регенерация побегов льна-долгунца из сегментов гипокотилей
2.8. Регенерация побегов льна крупноцветкового и многолетнего из эксплантов различного типа
2.9. Адаптация растений льна-долгунца, многолетнего и крупноцветкового
к условиям in vivo
2.10. Колонизация растений льна-долгунца, многлетнего и крупноцветкового метилобактериями Methylovorus mays
2.10.1 Колонизация семян
2.10.2. Колонизация эксплантов
2.11. Индуцирование процессинга агробактериальной Т-ДНК экссудатами растений
2.11.1. Инкубация Agrobacteriam tumefaciens с экссудатами тканей растений
2.11.2. Выделение тотальной ДНК Agrobacterinm tumefaciens
2.11.3. Трансформация клеток Escherichia coli
2.11.4. Быстрое выделение небольшого количества плазмидной ДНК методом щелочного лизиса
2.12. Выделение суммарной растительной ДНК
2.13. Анализ геномной ДНК трансгенных растений методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.14. Агробактериальная трансформация льна-долгунца

антибиотиков, широко применяемых в агробактериальной трансформации также могут стимулировать процессы регенерации растений. Добавление в среду для регенерации цефотаксима (60-100 мг/л) значительно стимулировало рост, регенерацию и эмбриогенез каллусов пшеницы (Mathias a. Boyd, 1986) и ячменя (Mathias a. Mukasa, 1987). Использование селективного антибиотика канамицина в низких концентрациях (2-8 мг/л) приводило к значительной стимуляции регенерации табака и моркови (Owens, 1979). Однако механизмы стимуляции антибиотиками регенерации растений в настоящее время не известны (Mathias a. Boyd, 1986).
1.8. Регенерация и агробактериальная трансформация льна культурного (Linum
mitatissimum L.)
1.8.1. Биология объекта
Семейство Linaceae, включающее 18 родов и около 330 видов, распространено по всему земному шару, но главным образом в умеренных и субтропических его областях. Род Лен (Linum L.) является наиболее крупным родом в этом семействе. Ему принадлежит около 200 видов, из которых в России произрастает 45.
Наиболее важным представителем рода Linum в хозяйственном отношении является лен культурный (Linum mitatissimum L.) - однолетнее самоопыляющееся растение. Важность этого вида для мировой экономики обусловлена тем, что льняное волокно уникально по своим гигиеническим и техническим свойствам, а семена являются источником масла и белка (Егорова, 1981).
Особенностью анатомического строения стебля льна культурного является наличие в его коре развивающихся из перицикла лубяных волокон - прозенхимных клеток, длиной 4-60 мм и шириной 20 -30 мкм с сильно утолщенными клеточными оболочками.