Структурно-функциональная организация оболочки дрожжей-деструкторов поверхностно-активных веществ

• Автор: Файзутдинова, Рушания Ниловна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 152 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Принятые сокращения
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I I Поверхностно- активные вещества как поллютанты
окружающей среды
1.1.1. Общие сведения о производстве ПАВ
1.1.2. Проблема воздействия ПАВ на окружающую среду
1.1.3. Воздействие ПАВ на биологические объекты
1.1.3.1. Взаимодействие ПАВ с дрожжевыми микроорганизмами
1.1.3.2. Механизмы взаимодействия ПАВ с субклеточными структурами
A. ПАВ - мембраны
Б. ПАВ - поверхностные полисахариды клетки
B. Механизмы взаимодействия ПАВ с ферментами
I.II. Резистентность микроорганизмов к ПАВ и способность к
биодеградации этих соединений
1.11.1. Общие представления о резистентности и биоразлагае-мости
1.11.2. Пути микробного метаболизма НПАВ-
I.III. Клеточная оболочка дрожжевой клетки
1.111.1. Организация клеточной оболочки базидиомицетных дрожжей
1.111.2. Ультраструктурная организация клеток дрожжей
рода Cryptococcus
1.111.3. Оболочка дрожжей как внешняя метаболическая
зона
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава II. Материалы и методы исследования
II. 1. Материалы и реактивы, используемые в работе
11.2.1. Микроорганизмы и условия культивирования
11.2.2. Условия хранения культур микроорганизмов
II.3. Препаративные методы
11.3.1. Получение гомогенатов клеток
11.3.2. Экстракция липидов
11.3.3. Выделение ДНК
11.4. Аналитические методы
11.4.1. Определение прироста биомассы
11.4.2. Количественное определение лаурокса-9, лауриновой кислоты и ПЭГ
И.4.3. Количественное определение свинца
II.4.4: Определение ферментативных активностей
И.4.5. Определение жизнеспособности клеток
11.4.6. Морфометрический анализ размеров клеточных структур
11.4.7. Статистический анализ экспериментальных данных
11.5. Электронно- микроскопические методы
И.5.1. Метод ультратонких срезов
11.5.2. Электронно-микроскопическая криофрактография
11.5.3. Электронно- микроскопическая цитохимия
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава III. Деструкция лаурокса-9 культурой Cryptococcus humicola
штамм S
III. 1. Использование лаурокса-9 в качестве единственного источника углерода и энергии
111.2. Деструкция лаурокса-9 - осуществляется внеклеточно
111.3. Влияние лаурокса-9 на жизнеспособность С.humicola
111.4. Электронно- цитохимическое определение локализации гидролаз
111.5. Оптимизация методов электронно- цитохимического обнаружения гидролаз
111.5.1. Хлорметилсилатран- новый субстрат для электронноцитохимической локализации гидролаз
111.5.2. Использование Lowicryl - низкотемпературной полимеризационной среды
Глава IV. Особенности ультраструктуры оболочки С. humicola
при росте на среде с глюкозой
IV. 1. Ультраструктура клеточной стенки и капсулы С.humicola
IV.2. Ультраструктура плазмалеммы С. humicola
Глава V. Субстрат-зависимые ультраструктурные изменения
С.humicola при росте на ПАВ-содержащей среде
V. 1. Ультраструктура клеточной стенки , капсулы и плазмалем-
мы С.humicola при переносе на среду, содержащую
лаурокс-9. Первичное воздействие ПАВ
V.2. Ультраструктура клеток на стадии активного
гидролиза лаурокса-9. Фаза логарифмического роста. - -110 V.2.1. Клеточная стенка и протоплазма С.humicola на стадии
логарифмического роста
У.2.2. Плазмалемма С.humicola в экспоненциальной фазе ростаї
V.2.3. Изменение ультра структуры митохондрий у клеток
С.humicola, активно гидролизующих лаурокс
Глава VI. Роль экстрацеллюлярных компонентов в процессе
деструкции лаурокса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Позднее, исследования ультраструктуры C. neoformans были продолжены на штаммах М 620 и Neill 5, выращенных на агаризованных дек-строзо-содержащих средах (Edwards et al., 1967). Особо отмечалось, что основные отличия от других ранее изученных дрожжей заключаются в строении клеточной оболочки, при этом внутриклеточное строение не отличается от такового других дрожжей. ЦПМ описана как волнообразно изгибающаяся структура, прилегающая к внутренней стороне КС, в некоторых точках инвагинирующая внутрь цитоплазмы, образующая мезосомоподобные структуры. Этот факт авторы даже предлагали рассматривать как прокариотическую черту C. neoformans. Как и в предыдущей работе, авторы использовали метод ультратонких срезов и подчеркнули, что ЦПМ лучше выявляется при глутаральдегид-осмиевой фиксации, чем при перманганатной. В работе Эдвардса с соавт. толщина

ЦПМ оценивалась примерно в 75- 90 А. Толщина КС варьировала в пре-

делах от 480 до 860 А . Тонкая структура КС не была исследована, но отмечалось, что между КС и капсулой четко видна электронно- прозрачная зона - гало. При этом отмечалось, что капсула, размеры которой при световой микроскопии оценивались примерно в 3,5 мкм, значительно уменьшалась при выполнении электронно- микроскопических процедур. Хорошо сохранившуюся капсулу можно было обнаружить достаточно редко, при этом периферическая зона капсулы терялась. Капсулярный материал был представлен тонкими микрофибриллами. Позже были опубликованы результаты исследования цитоплазматических и экстрацеллюлярных структур Cryptococcus laurentii и некоторых видов Rhodotorula sp. (Ruinen et al., 1968).
В 1973 г. были опубликованы результаты исследований тонкой структуры C. neoformans методами замораживания-скалывания (freese-fracture) и замораживания-травления (freese- etching) (Takeo et al., 1973a). Эти результаты значительно расширили представления о структуре капсулы, КС и, особенно, ЦПМ. Были исследованы два штамма: Okuno и IFO 608. Поскольку капсула является сильногидрати-рованным компонентом клеточной оболочки, то ее можно визуализиро-