Идентификация клинически значимых грибов и диагностика инвазивной грибковой инфекции методом газовой хроматографии

• Автор: Поздоровкина, Вера Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 158 с.

Оглавление
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Современные методы идентификации и диагностики грибковой инфекции -проблемы и перспективы.
Глава 2. Материалы и методы.
2.1.Описание биологического материала.
2.2.Подготовка образцов для хроматографического и масс - спектрометрического анализов.
2.3.Условия хроматографического и масс-спектрометрического анализа.
ГлаваЗ. Идентификация различных микроскопических грибов по химическому составу клеточной биомассы.
3.1.Изучение жирнокислотного состава биомассы клеток микроорганизмов рода Candida и некоторых других грибов.
3.2.Изучение состава моносахаров биомассы грибов Candida и некоторых других клинически значимых грибов.
3.3.Видовая идентификация грибов рода Candida по составу клеточных моносахаров и жирных кислот с использованием персонального компьютера.
Глава 4. Химический состав продуктов метаболизма представителей различных родов грибов в опытах in vitro.
4.1.Изучение состава свободных сахаров культуральных сред после роста грибов рода Candida и некоторых других грибов.

4.2.Изучение состава летучих и нелетучих кислот,
спиртов и аминов - продуктов жизнедеятельности грибов
рода Candida и других
Глава 5. Экспресс - диагностика инвазивной
грибковой инфекции по метаболитам - маркерам грибов
5.1.Газохроматографическая экспресс-диагностика
кандидоза и мониторинг эффективности проводимой терапии
5.2.Количественное определение маннитола в сыворотке крови и ликворе с целью диагностики инвазивного аспергиллеза
Заключение
Выводы
Приложения
Методические рекомендации
Список литературы

Введение.
Актуальность темы исследования.
Как показывают отечественные и зарубежные исследования, в последние годы резко возросло количество микозов, вызванных условно-патогенными грибами у больных с ослабленным иммунитетом, в связи с применением широкого спектра антибиотиков, цитостатиков и глюкокортикостероидов (Романюк Ф.П., 1996; Антонов В.Б., 1995; Степанова Ж.В., 1990; Brown
А.Е. 1990) . Все они снижают иммунитет и этим способствуют активизации условно-патогенной флоры, к которой относятся микроскопические грибы.
Среди прочих возбудителей микозов ведущее место занимают грибы рода Candida, вызывающие различные формы кандидоза, в том числе висцеральные и системные (Самсыгина Г.А.,1996). Частота гнойно-воспалительных заболеваний, обусловленных грибами рода Candida, особенно Candida albicans достигает 15% в общей этиологической структере гнойно-воспалительных болезней (Пронина Е.В. 1996). При присоединении кандида-инфекции при любом соматическом заболевании наблюдается значительное ухудшение общего состояния больного, нередко
развивается сепсис, протекающий с высокой степенью
летальности (Tang С.М., 1992). Причем в 40-60% случаев
кандидоз остается нераспознанным или поздно
диагностированным, и это значительно усугубляет его прогноз (Самсыгина Г.А.,1996).
Своевременная идентификация и диагностика возбудителя, и как следстие - правильно начатое лечение, с одной стороны
может существенно снизить указанную летальность, с другой -предотвратить часто неоправданное назначение высоко токсичных и дорогих препаратов, таких, как амфотерИцин В, при эмпирической терапии.

посуду. При поступлении в лабораторию нативный материал подвергался прямой микроскопии. Обнаружение при микроскопии почкующихся клеток и нитчатой фазы возбудителя являлось важным диагностическим признаком.
Посев крови и ликвора производился на жидкую среду Сабуро в соотношении 1:10. Патологический материал, содержащий нормальную микрофлору, разводился методом серийных разведений в жидкой среде Сабуро и высевался в количестве 0,1мл на аналогичную плотную среду. При отсутствии роста посевы инкубировались до 10 суток, с периодическими высевами на плотные питательные среды. При наличии роста осуществлялся клинический учет колоний в патологическом материале. После выделения и количественного учета культур дрожжеподобных грибов их идентифицировали. Культивирование грибковых культур осуществляли на чашках Петри с агаровой средой Сабуро в 2-х температурных режимах: при 28° и 37°С до 2-х недель
идентификации грибковых культур использовали чистые первичные 48-часовые культуры или вторичные 24-часовые культуры.
Критериями идентификации служили:
1) характер роста культур на агаровых (среда Сабуро) и жидких средах (жидкая среда Сабуро);
2) микроморфология культур (по нативным препаратам форма дрожжевых клеток, характер почкования, наличие псевдомицелия и истинного мицелия);
3) образование "ростовых трубок" (экспресс-видовой тест на С.albicans);
Для этого теста использовали 24-х или 48-часовые культуры. В центрифужную пробирку вносили 0,2мл сыворотки (можно использовать сыворотку после биохимических, иммунологических исследований) или плазмы. По стенке этой пробирки на границе с жидкой средой петлей растиралась биомасса (небольшое количество) дрожжевой колонии, т.е. готовилась взвесь. Затем пробирки инкубировали при 37°С в