Сравнительное изучение мембраносвязанной и периплазматической щелочной фосфатазы ESCHERICHIA COLI

• Автор: Колот, Михаил Наумович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 141 c. : ил

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Секретируемые белки бактерий ГЛАВА I. Секретируемые белки бактерий и особенности их
биосинтеза
1. Секретируемые белки бактерий
2. Особенности биосинтеза секретируемых белков . . II
3. Природа предшественников секретируемых белков
ГЛАВА II. Щелочная фосфатаза E.coli - секретируемый
фермент
1. Структура и свойства щелочной фосфатазы
2. Особенности биосинтеза щелочной фосфатазы, как мембраносвязанного процесса
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА III. Методы исследования
1. Используемый штамм и его свойства
2. Условия выращивания культуры
3. Получение растворимой фракции и мембран
4. Солюбилизация мембраносвязанной щелочной фосфатазы различными агентами
5. Выделение и очистка периллазматической и мембраносвязанной щелочной фосфатазы
6. Разделение множественных форм периллазматической щелочной фосфатазы

7. Электрофоретические системы
8. Определение молекулярной массы щелочной фосфатазы с помощью гельфильтрации на сефадексе С-200
9. Снятие ультрафиолетовых спектров
10. Хроматография на октил-сефарозе
11. Обратимая денатурация щелочной фосфатазы
12. Взаимодействие щелочной фосфатазы с искусственными фосфолипидными мембранами
13. Аналитические методы
14. Реактивы
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава IV. Выделение и очистка лериплазматической и мембраносвязанной щелочной фосфатазы E.eoli
1. Выбор оптимальных условий для солюбилизации мембраносвязанной щелочной фосфатазы
2. Выделение и очистка периллазматической и мембраносвязанной щелочной фосфатазы
3. Разделение множественных молекулярных форм периллазматической щелочной фосфатазы
Глава V. Сравнительное изучение некоторых физико-химических и кинетических свойств мембраносвязанной и периллазматической щелочной фосфатазы E. coli
1. Молекулярная масса
2. Ультрафиолетовые спектры
3. Оптимум pH
4. Влияние температуры, ионной силы и катионов

металлов
5. Субстратная специфичность и ингибирование
6. Амфифильные свойства
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ШВОЛН
ЛИТЕРАТУРА

Для электрофореза в ПААТ использовали реактивы - Serva (ФЕТ), для электрофореза в агарозе - агарозу -Bio - RaD (США). При приготовлении буферных растворов использовали трие-Serva (ФРГ)
И имидазол- Sigma (США).
В качестве бактерицидного агента использовали мертиолят
- Sigma (США).
Для определения молекулярной массы и при изучении обратимой денатурации использовали следующие маркерные белки: химотрипсино-ген А, яичный альбумин, бычий сывороточный альбумин, миоглобин, каталазу, альдолазу, лизоцим -Serva (ФРГ), фосфорилазу , щелочную фосфатазу - sigma (США), алкогольдегидрогеназу, пируват-киназу, Reanal (Венгрия), ß -амилазу - Wortington (Англия), о( -амилазу-fvuка (Швейцария).
В работе были использованы детергенты: тритон Х-100, цетил-триметиламмоний бромид - Serva (ФРГ), дезоксихолат натрия - Koch-
- Light? (Англия), кислые фосфолипиды: фосфатидилглицерин, кар-диолипин; полимиксин Б - Sigma (США).
В работе были использованы следующие субстраты: паранитрофе-нилфоефат, глюкозo-6-фосфат- Serva (ФРГ), / -глицерофосфат
- Merck (ФРГ), пирофосфат, 5*-АМР, з’-АМР, 2’-АМР, б’-АДР.б’-АТР, аденозин, аденин, аденин-фосфат, цитидин-2 ’-3 ’-глонофосфат- Sigma (США), паранитрофенол, цитидил-3’-5’-аденозин- Koch- Light-(Англия), 5’-СДР, 5*-UDP , б’-GDP , рибозо-5-фосфат, фруктозо-6-фосфат- Reanal (Венгрия) , ТрИЛОЛИфосфаТ- Monsanto Со (США), полифосфаты ( п=180) были любезно предоставлены проф. Грюнце (Институт неорганической химии Немецкой Академии наук в Берлине). Неорганический ортофосфат - марки о.с.ч. Ленинградского з-да
"Красный химик". Все остальные реактивы были отечественного производства.