+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

РНК-гидролизующие антитела из сыворотки крови больных системной красной волчанкой

  • Автор:

    Андриевская, Ольга Анатольевна

  • Шифр специальности:

    03.00.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    1998

  • Место защиты:

    Новосибирск

  • Количество страниц:

    126 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

Список сокращений
АТ антитела
ДНТФаза терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза
дцДНК двуцепочечная ДНК
дцРНК двуцепочечная РНК
ВИП вазоактивный интестинальный пептид
КААТ каталитически активные антитела
оцДНК одноцепочечная ДНК
оцРНК одноцепочечная РНК
ПААГ полиакриламидный гель
ПСА персульфат аммония
ПЭГ полиэтиленгликоль
НК нуклеиновая кислота
СКВ системная красная волчанка
ТЕМЕД N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамин
ТХУ трихлоруксусная кислота
ЭДТА этиленаминтетраацетат
BF бромфеноловый синий
Ig иммуноглобулин
ON олигонуклеотиды
SDS додецилсульфат натрия
MES 2-морфолиноэтил-сульфокислота
ME 2-меркаптоэтанол

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Каталитически активные антитела
1.1.1. Айтитела к стабильным аналогам комплекса переходного
состояния химических реакций
1.1.2. Природные абзимы
1.1.2.1. Антитела с протеолитической функцией
1.1.2.2. ДНК-гидролизующие иммуноглобулины
1.1.2.3. Роль природных абзимов в патогенезе заболеваний
1.1.2.4. Природные абзимы человеческого молока
1.1.2.5. Возможные механизмы возникновения природных абзимов
1.2. Нуклеазы человека
1.2.1. Внеклеточные ДНКазы человека
1.2.1.1. Классификация и биологические функции
1.2.1.2. ДНКаза I человека
1.2.1.3. ДНКаза II человека
1.2.2. Внеклеточные РНКазы человека '
1.2.2.1. Классификация РНКаз человека суперсемейства РНКазы А
1.2.2.2. Механизм реакции гидролиза РНК
1.2.2.3. Субстратная специфичность
1.2.2.4. Взаимодействие с poly(A) и дцРНК
1.2.2.5. Эффективность катализа
1.2.2.6. Взаимодействие с низкомолекулярными субстратами
1.2.2.7. Влияние ионной силы и катионов на активность РНКаз
1.2.2.8. Взаимодействие РНКаз с ингибитором
1.2.2.9. Филогенез семейства РНКазы А
1.2.3. Лактоферрин
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Реактивы и материалы

2.2. Методы
2.2.1. Выделение иммуноглобулинов
2.2.1.1. Выделение
2.2.1.2. Выделение 1дМ
2.2.2. Аффинная хроматография 1£ на ДНК-целлюлозе
2.2.3. Определение концентрации белков
2.2.4. Электрофоретический анализ белков
2.2.5. Анализ препаратов АТ методом двойной радиальной иммунодиффузии
2.2.6. Получение РаЬ-фрагментов иммуноглобулинов
2.2.7. Получение и очистка [5'-32Р] олигонуклеотидов
2.2.8. Синтез [3Н] олигодезоксирибоаденилатов
2.2.9. Выделение рибонуклеаз из сыворотки крови человека
2.2.10. Методы определения нуклеазной активности АТ и РНКаз
2.2.10.1. Определение активности АТ в реакции гидролиза ДНК рВЯ
2.2.10.2. Определение активности АТ и РНКаз в реакции гидролиза 54 полирибонуклеотидов
2.2.10.3. Определение нуклеазной активности препаратов АТ по гидролизу 55 олигонуклеотидов
2.2.11. Определение субстратной специфичности АТ
2.2.12. Определение оптимальных условий гидролиза
2.2.13. Определение кинетических параметров реакции гидролиза
2.2.14. Определение термостабильности абзимов и РНКаз сыворотки
2.2.15.Тестирование нуклеазной активности в геле
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выделение каталитически активных иммуноглобулинов из сыворотки крови человека
3.2. Связывание каталитически активных антител аффинными сорбентами
3.3. Рибонуклеазная активность РаЬ-фрагментов антител
3.4. Тестирование РНК- и ДНК-гидролитических активностей препаратов 77 иммуноглобулинов в геле после электрофоретического разделения
3.5. Субстратная специфичность антител и РНКаз сывортки крови человека

что, возможно, мешает продуктивному связыванию субстрата и приводит к полной потере активности РНКазы4 в отношении цитидин-динуклеотидов [108]. Thr -45 сохраняется в РНКазе 4, но окружающие его неконсервативные аминокислоты могут влиять на сродство к субстрату. Так, Val-43 РНКазы 1 заменен в РНКазе 4 на фенилаланин, который может взаимодействовать с урацилом совершенно иным способом по сравнению с валином, изолейцином и глутамином - остатками, обнаруженными в этом положении у других РНКаз. Кроме того, замена структурно важного остатка Рго-42, находящегося в пределах активного центра, на аргинин, возможно, так же влияет на расположение аминокислотных остатков в этом сайте.
1.2.2.1.З. Взаимодействие с poly(A) и дцРНК.
Характерным свойством человеческой РНКазы 1 является ее способность расщеплять poly(A) и двуцепочечную РНК, причем уровень активности в отношении этих субстратов на два порядка выше, чем у бычьей панкреатической РНКазы А [85, 86]. РНКазы 2, 3 и 4 неактивны в отношении данных субстратов [35, 77, 78, 105]. По мнению авторов работы [120], Asp-83 в РНКазе А может играть важную роль в активности по отношению к поли(А). У человеческой РНКазы 1 в положении 83 сохраняется аспартат, а у РНКаз 2 и 3 в соответствующем положении находится гистидин.
Ферментативное расщепление двуцепочечной РНК панкреатическими РНКазами может происходить благодаря связыванию фермента с короткими одноцепочечными последовательностями субстрата, появляющимися в результате термических флуктуаций [35, 78, 124]. В пользу этого механизма свидетельствуют данные о том, что РНКаза 1 эффективно дестабилизирует двуцепочечные ДНК, тогда как РНКазы 2 и 3 не обладают такой активностью, несмотря на высокую основность этих белков. Парес X. (Pares X.) и соавт. объяснили способность бычьей РНКазы А дестабилизировать дцДНК наличием в белке нескольких центров связывания фосфатов - протяженного катионного кластера [125] . Яковлев Г. и соавт. в работе [124] сравнили РНКазу А, человеческую РНКазу из семенной жидкости (т.е. РНКазу 1) и РНКазу спермы быка по способности расщеплять двуцепочечную РНК и установили, что высокая активность РНКазы 1 человека и понижение активности в ряду РНКаза 1 человека > семенная РНКаза быка > РНКаза А является функцией количества и расположения положительных зарядов на поверхности белковой молекулы. В связи с этим более высокий уровень гидролитической активности

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.167, запросов: 967