Распределение введенных в кровоток белковых препаратов при артериальной тромботической окклюзии

• Автор: Матвеев, Максим Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Краткие физические характеристики кровеносной системы
2. Тромбообразование в артериях и венах
3. Структура и свойства артериального и венозного тромбов
4. Экспериментальные модели тромбозов
4.1. Модели артериальных тромбов
4.2. Модели венозных тромбозов
5. Биохимические характеристики основных тромболитических агентов
6. Основные направления исследований, проводимых с целью повышения 21 эффективности тромболитической терапии.
7. Проницаемость фибринового геля и кровяного сгустка
8. Биофизические характеристики тромболизиса. ’
Заключение ' "
ГЛАВА Н МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Реактивы
2. Растворы
3. Методы исследования
3 .1 Выделение и очистка моно- и поликлональных антител и приготовле
ние иммуносорбентов.
3.2. Синтез конъюгатов антител
3.3. Анализ эффективности применения химерных антител для лизиса 39 плазменного сгустка.
3.4. Иммуноферментная тест-система для количественного определения 40 урокиназы в плазме крови.
3.5. Определение скорости диффузии макромолекул в фибриновый гель и 41 в сгустки, образованные из плазмы и крови собаки.
3.6. Определение скорости фильтрации жидкости через обтурирующий 44 тромб сонной артерии кролика.

3.7. Определение интенсивности перемешивания в закупоренном участке 46 артериального сосуда.
3.8. Распределение рекомбинантной проурокиназы в закупоренной сонной 50 артерии кролика.
ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Направленная доставка тромболитического агента к сгустку плазмы с 51 помощью конъюгата моноклональных антител против урокиназы и фибрина.
2. Определение скорости диффузии макромолекул в фибриновый гель ив 56 сгустки, образованные из плазмы и крови собаки.
3. Определение скорости фильтрации жидкости через обтурирующий 59 тромб сонной артерии кролика.
4. Определение интенсивности перемешивания крови в закупоренном уча- 60 стке артериального сосуда.
4.1. Эксперименты In Vivo
4.2. Эксперименты In Vitro
5. Распределение рекомбинантной проурокиназы в закупоренной сонной 65 артерии кролика.
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Эффект направленной доставки тромболитика в сгусток плазмы
2. Накопление макромолекул в кровяном сгустке in vitro
3. Проницаемость артериального тромба in vivo
4. Интенсивность перемешивания крови в закупоренном участке артери- 75 ального сосуда.
5. Распределение рекомбинантной проурокиназы в закупоренной сонной 81 артерии кролика.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Предотвращение кровопотери при нарушении целостности кровеносного русла является основной биологической функцией тромбообразующей системы крови. В разных участках кровеносной системы существуют различные физические и биохимические условия, что приводит к различиям в механизмах образования тромба - основного фактора прекращения кровотока.
При патологическом развитии процесса тромбообразования, в частности, при возникновении обтурирующего тромба, происходит изменение параметров микро- и макроциркуляции крови. При этом включаются компенсаторные механизмы организма, приводящие к функциональным изменениям тромбообразующей и тромбо-литической систем крови. Последняя несет ответственность за своевременную очистку кровеносного русла от выполнивших свою роль тромбов.
Возникновение тромба в магистральном сосуде может привести к ишемии участка органа, за который ответственен пораженный сосуд, и, в дальнейшем, к потере у органа способности выполнять физиологическую функцию (инфаркт миокарда и мозга), а также к гангрене.
На сегодняшний день одним из самых эффективных приемов при лечении подобных заболеваний является применение тромболитических агентов (в частности, активаторов плазминогена), которые представляют собой белки с молекулярной массой 50 - 90 кД. Для повышения эффективности тромболизиса используют комплексы активаторов плазминогена с антителами к компонентам тромба. Молекулярный вес подобных комплексов составляет 200-300 кД. Также для определения бассейна тромбированного сосуда методом иммуносцинтиграфии используются меченые радиоактивной меткой антитела к компонентам тромба (мол. вес 150-170 кД).

ГЛАВА П
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
I. Реактивы.
В работе были использованы следующие реактивы: NaCl (ОСЧ); СаСЬ (ОСЧ); борная кислота (ХЧ); NaOH (ХЧ); НС1 (ХЧ); тетраборат натрия (ОСЧ); ШгСОз (ХЧ); (NHt)2.S04 (ОСЧ); уксусная кислота (ХЧ), трихлоруксусная кислота (ХЧ); натрия тиопентал (Россия), Tween-20 (Ferrak, Германия); Na2HP04 (ХЧ); МаНгРОд (ХЧ); глицин; кумаси-синий R-250; бычий сывороточный альбумин (фракция V); цитрат натрия; персульфат аммония; ацетат натрия; N,N,N‘,N',-TeTpaMeTH лен ди амид (TEMED); пероксидаза хрена (1362 U/mg); лимонная кислота (Serva, Германия); Tris-НС1; бензамидин-HCl; Tris, фибриноген человека (Sigma, США); ацетон; глицерин; акриламид; бисакриламид; (Merck, Германия): агароза; додецилсульфат натрия, эта-ноламин; перйодат натрия; бычий сывороточный альбумин (БС A) (Fluka, Германия); DEAE-Sepharose CL-4B; Sephadex G-10f; Sephadex G-25; BrCN-Sepharose 4B (Pharmacia, Швеция), гидроксилаппатит Bio-Gel HTP (Bio-Rad, США); альбумин человека (Реанал, Венгрия); м-малеимидобензоила N-оксисукцинимидный эфир (MBS), N-этилмалеимид (NEM), 5,5'-дитио-бис-(2-нитробензойная кислота) (DTNB) и гидроксиламин (Нуа) (Fluka, Германия); 1Ы-оксисукцинимидил-8-ацетилтиоацетат (SATA) (Calbiochem, Швейцария), диметилформамид (ДМФА) (Serva, Германия), 2-меркаптоэтанол (ME) (Merck, Г ермания); сефадекс G-25 (Pharmacia, Швеция); ультрагель АсА-44 (LKB, Швеция); йодоген (Pjerçe, Англия), хромогенный субстрат S2444 (Kabi Diagnostics, Швеция); остальные реактивы, в том числе Nal123, отечественного производства марок "ХЧ" или "ОСЧ",