Молекулярно-генетические маркеры предрасположенности к гипертонической болезни населения Республики Татарстан

• Автор: Газизова, Регина Гадельшовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 170 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ АСЕ - ангиотензин-превращающий фермент
AGT - ангиотензиноген
AT1R - рецептор ангиотензина II первого типа
LPL - липопротеинлипаза
РАС - ренин-ангиотензиновая система
PON 1 - параоксоназа
REN - ренин
SNP - (single nucleotide polymorphisms) - однонуклеотидные замены
Р-ЛП - Р-липопротеины
АГ - артериальная гипертензия
АД - артериальное давление
АРОЕ - аполипопротеин Е
ГБ - гипертоническая болезнь
ДАД - диастолическое артериальное давление
NOS3 - эндотелиальная синтаза оксида азота
ИМТ - индекс массы тела
ЛПВП - липопротеины высокой плотности
ЛПНП - липопротеины низкой плотности
ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности
ОХЛ - общий холестерин
ОШ - отношение шансов
САД - систолическое артериальное давление
ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания
ТАГ - триацилглицерины
ХМ - хиломикроны
ЭГ - эссенциальная гипертензия
95% ДИ0ш - 95% доверительный интервал отношения шансов
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Молекулярная медицина и мультифакторные заболевания
1.2. Генетические полиморфизмы и мутации
1.3. Гипертоническая болезнь. Молекулярно-генетические аспекты
1.4. Полиморфизм генов-кандидатов гипертонической болезни
1.4.1. Геныренин-ангиотензиновой системы
1.4.2. Гены метаболизма липидов
1.4.3. Ген эндотелиальной синтазы окиси азота
1.5. Генетическое тестирование и ранняя диагностика мультифакторных заболеваний
1.6. Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение ДНК
2.2.2. Полимеразная цепная реакция
2.2.3. Рестрикционный анализ
2.2.4. Разделение и визуализация продуктов амплификации и рестрикции
2.3. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Характеристика образцов ДНК для генотипирования
3.2. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов ренин-ангиотензиновой системы с гипертонической болезнью
3.2.1. Полиморфизм Т174М гена ангиотензиногена
3.2.2. Полиморфизм М235Т гена ангиотензиногена
3.2.3. Полиморфизм А-20С гена ангиотензиногена
3.2.4. Гаплотипный анализ полиморфных маркеров гена ангиотензиногена
3.2.5. Полиморфизм A2350G гена ангиотензин -превращающего фермента
3.3. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов метаболизма липидов с гипертонической болезнью
3.3.1. Полиморфизм е2еЗе4 гена аполипопротеина Е
3.3.2. Hind III - полиморфизм гена липоротеинлипазы
3.3.3. Полиморфный маркер С1п192А^ гена параоксоназы
3.4. Анализ ассоциации полиморфизма минисателлита еЫ084а/Ь гена эндотелиальной синтазы окиси азота с гипертонической болезнью
3.5. Анализ связи полиморфных маркеров с клиническими и
биохимическими факторами гипертонической болезни
3.5.1. Связь с уровнем артериального давления
3.5.2. Связь с содержанием липидов в сыворотке крови
3.6. Оценка связи полиморфных маркеров с возрастом манифестации гипертонической болезни
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЕ

наличию (+) или отсутствию (-) сайтов рестрикции. Генотипы и аллели обозначали согласно рекомендациям, изложенным в работе Wain Н. (2002).
2.2.4. Разделение и визуализация продуктов амплификации и
рестрикции
Разделение продуктов амплификации и рестрикции проводили в нативном 5-8% полиакриламидном геле с использованием камеры для вертикального электрофореза («Хеликон», г. Москва) при напряженности электрического поля 8-10 В/см. Для нанесения образцов использовали буфер, содержащий 0,25% бромфенола, 0,25% ксиленцианола, 30 % сахарозы.
В качестве маркеров молекулярного веса использовали ДНК фага А, гидролизованную рестриктазой BsuRI, ДНК pUC19, гидролизованную рестриктазой Mspl и Kzo9I (коммерческие препараты производства ООО «СибЭнзим», г. Новосибирск).
Визуализацию продуктов амплификации и рестрикции проводили в УФ-излучении при 254 нм с помощью интеркалятора бромистого этидия (0,5 мкг/мл) и/или окрашиванием гелей нитратом серебра по стандартной методике (Budowle, 1991) с последующей фиксацией в 10% глицерине и высушиванием.
Все этапы работы с ДНК, амплификатами и рестриктами проводились с использованием одноразовой пластиковой посуды и наконечников для автоматических пипеток.
2.3. Статистическая обработка данных
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Microsoft Excel 7.0 и пакета статистических программ "SPSS-14.0".
Соответствие полученных распределений частот аллелей и генотипов теоретически ожидаемым оценивали с помощью критерия у2. Для ситуаций с малыми ожидаемыми численностями использовали модификацию критерия