Особенности кальциевой сигнализации в пролиферирующих и дифференцирующихся миобластах линии C2C12 мыши

• Автор: Красный, Алексей Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 93 с. : ил.

Введение
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Кальциевая сигнализация
1.1.1. Поступление Са2+ в цитоплазму клеток при стимуляции клеточных
рецепторов
1.1.2. Са2+ - транспортирующие системы
1.1.3. Мобилизация Са2'1' из внутриклеточных структур
1.1.3.1. Инозитолтрифосфатный рецептор (1Р3К)
1.1.3.2. Рианодиновый рецептор (ЯуК)
1.1.4. Са2+-каналы плазматической мембраны
1.1.4.1. Потенциал-управляемые Са2+-каналы
1.1.4.2. Рецептор-управляемые Са2+-каналы плазматической мембраны
1.1.4.3. Истинные рецептор-управляемые каналы
1.1.4.4. Са2+-каналы, активируемые вторичными посредниками
1.1.4.5. Са2+-каналы, регулируемые высвобождением Са2+ из
внутриклеточные депо
1.2. Формирование мембранного потенциала
1.3. Кальциевая сигнализация в миобластах
1.4. Кальциевая сигнализация и некоторые патологические состояния
мышечной системы: миодистрофия Дюшенна-Беккера
1.5. Адренергические рецепторы
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объект исследования
2.2. Культивирование клеток
2.3. Оценка внутриклеточных запасов Са2+
2.4. Флуоресцентные исследования Са2+
2.5. Реактивы и концентрации, используемые при флуоресцентных
исследованиях Са2+
2.6. Оценка концентрации Са2+ в митохондриях

2.7. Выделение тотальной РНК
2.8. Определение концентрации тотРНК в пробе
2.9. Выделение мРНК
2.10. Синтез кДНК
2.11. Конструирование праймеров
2.12. Нормировка кДНК библиотек
2.13. ПЦР-анализ
2.14. Выделение ДНК из агарозного геля
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Ретикулярные запасы Са2+ в пролиферирующих миобластах
3.2. Ретикулярные запасы Са2+ дифференцирующихся миобластов
3.3. Сравнение кинетики удаления Са2+ из цитоплазмы пролиферирующих и дифференцирующихся миобластов
3.4. Роль митохондрий в регуляции концентрации Са2+ в цитоплазме пролиферирующих миобластов
3.5. Анализ механизмов кальциевой сигнализации в пролиферирующих миобластах
3.5.1. Механизмы активации входа Са2+ в клетку
3.5.2. Выявление каналов, проводящих Са2 в цитоплазму делящихся
миобластов
3.5.3. Выявление типа адренергических рецепторов, вызывающих
поступление Са2+ в цитоплазму миобластов
3.5.4. Передача сигнала от адренергических рецепторов к
потенциалзависимым кальциевым каналам Ь-типа
3.6. Оценка поступления Са2+ в цитоплазму дифференцирующихся миобластов при активации адренергических рецепторов адреналином
3.7. Влияние деполяризации на поступление Са2+ в цитоплазму пролиферирующих миобластов
3.8. Экспрессия генов, кодирующих субъединицы потенциалзависимых кальциевых каналов Ь-типа в пролиферирующих и дифференцирующихся
миобластах
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Роль опустошения ретикулярных запасов Са2' во внутриклеточной кальциевой сигнализации в пролиферирующих миобластах
4.2. Роль адреналина во внутриклеточной кальциевой сигнализации в пролиферирующих миобластах
4.3. Механизм внутриклеточной кальциевой сигнализации в пролиферирующих миобластах
4.4. Роль и свойства кальциевого потенциалзависимого канала Ь-типа в пролиферирующих миобластах
4.5. Особенности кальциевой сигнализации через 24 часа после начала дифференцировки миобластов
4.6. «Кальциевые волны» в дифференцирующихся миобластах

4.7. Возможная роль митохондрий в регуляции концентрации Са в цитоплазме миобластов
4.8. Обсуждение механизмов кальциевой сигнализации в миобластах,
выявленных в данной работе
Выводы
Список литературы

1.5. Адренергические рецепторы
Для адренергических рецепторов лигандами являются катехоламины (дофамин, норадреналин (НА) и адреналин (А). Это группа естественных аминов, имеющих общую основу - группу катехола (бензольное кольцо с двумя гидроксильными группами) с прикрепленной аминогруппой. Катехоламины (КА) не проникают через гемато-энцефалический барьер. Норадреналин синтезируется в окончаниях симпатических нервных волокон. Адреналин синтезируется в мозговом слое надпочечников.
Адренергические рецепторы неоднородны. Алквист (АЫцшз!, 1948) предложил использовать обозначения аи(3 для рецепторов катехоламинов, активация которых приводит соответственно к сокращению (а) и расслаблению (Р) гладких мышц. Исключение составляют мышцы желудочно-кишечного тракта - активация обоих видов рецепторов обычно вызывает их расслабление. Все адренергические рецепторы имеют классическую для рецепторов, сопряженных с О-белками, структуру: - семь трансмембранных доменов с И-концом полипептида снаружи и с С-концом внутри клетки.
агАдренорецепторы встречается в сосудах большинства органов: печени, селезенки, почек, легких, эпикардиальных сердечных мышц, молочных желез, вен. Кроме того, они локализованы в мозжечеке, коре головного мозга, гладких мышцах.
Активация агадренорецепторов вызывает следующие эффекты:
сокращение сосудов, а также радиальной мышцы радужки; положительный инотропный эффект на сердце; спазм мочеточника, а также семявыводящего протока; активация гликогенолиза в печени; гиперполяризация и расслабление гладких мышц желудочно-кишечного тракта. а-адренорецепторы стимулируют также фосфоинозитидный обмен (высвобождение Са2+ из внутриклеточного депо).