Спектроскопические исследования физико-химических свойств церулоплазмина

• Автор: Яковлева, Татьяна Юрьевна
• Шифр специальности: 01.04.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 110 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Некоторые применяемые в диссертации сокращения
ВВЕДЕНИЕ
1. ПАРАМАГНИТНЫЕ И СПЕКТРОСКОПИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МЕДЬСОДЕРЖАЩЕЙ ГОЛУБОЙ ОКСИДАЗЫ - ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА
1.1. Основные физико-химические свойства церулоплазмина
1.2. Оптические свойства церулоплазмина
1.3. Флюоресценция церулоплазмина
1.4. Спектры ЭПР церулоплазмина
1.5. Окислительно-восстановительные потенциалы медьсодержащих центров церулоплазмина
1.6. Структура медьсодержащих центров 1, 2 и 3 типов
в церулоплазмине
1.7. Антиоксидантные свойства медьсодержащих белков
1.7.1. Связь между каталитической активностью белка
и присутствием в нем иона меди
1.7.2. Восстановительные реакции медьсодержащих белков
1.7.3. Окислительные реакции медьсодержащих белков
1.7.4. Феррооксидазная активность церулоплазмина
1.7.5. Антиоксидантная активность церулоплазмина
1.7.6. Внутримолекулярная цепь переноса электронов
в церулоплазмине
1.8. Действие лазерного излучения на кровь in vitro,
СОД и церулоплазмин
2. МЕТОДИКА И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА
2.1. Характеристики использованных препаратов церулоплазмина
2.2. Материалы, использованные для моделирования
цепи переноса электронов в церулоплазмине
2.2.1. Доноры электронов
2.2.2. Акцепторы электронов
2.2.3. Ингибиторы ионов меди 2 типа
2.3. Моделирование цепи переноса электронов
2.4. ЭПР-спектроскопия
2.4.1. ЭПР-спектрометры
2.4.2. Методика приготовления образцов для ЭПР-спектроскопии
2.5. Оптическая спектроскопия
2.6. Флуоресценция
2.7. Материалы и методы, используемые для изучения действия гелий-неонового лазера на кровь in vitro
2.8. Определение интенсивности процессов перекисного окисления липидов
2.9. Определение антиоксидантной активности плазмы
2.10. Определение оксидазной активности церулоплазмина, супероксиддисмутазной активности плазмы, активности супероксиддисмутазы в эритроцитах
3. СПЕКТРАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕХАНИЗМА ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА
3.1. Механизм внутримолекулярного переноса электронов
в лакказе
3.2. Существование внутримолекулярного переноса электронов в ЦП
3.3. Спектры поглощения ЦП при моделировании внутримолекулярной цепи переноса электрона
3.4. Спектры ЭПР ЦП при моделировании внутримолекулярной цепи переноса электрона
3.5. Флуоресценция белкового лиганда
3.6. Спектры флуоресценции ЦП при моделировании внутримолекулярной цепи переноса электрона
3.7. Обсуждение результатов
4. ДЕЙСТВИЕ ИЗЛУЧЕНИЯ ГЕЛИЙ-НЕОНОВОГО ЛАЗЕРА
НА КРОВЬ IN VITRO
4.1. Применение облучения крови Не-Ые лазером
4.2. Регистрация влияния облучения крови Не-Ые
лазером
4.3. Изучение влияния различных доз облучения
на процессы перекисного окисления липидов
4.4. Изучение влияния различных доз облучения на оксидазную активность ЦП и супероксиддисмутазную
активность плазмы крови
4.5. Роль повышения уровня меди в плазме после облучения крови в повышение общего антиоксидантного статуса плазмы крови
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЕ

скопическими и химическими свойствами. Медьсодержащие центры'1 типа встречаются или совместно с центрами 2 и 3 типов в "голубых" оксидазах, или только одни в "голубых" электрон-переносящих белках. Медьсодержащие центры 2 типа обычно встречаются в комбинации с центрами 1 и 3 типов. Медьсодержащие центры 3 типа встречаются только одновременно с двумя другими центрами.
Прямое доказательство наличия связи между каталитической активностью белка и присутствием в нем иона меди состоит в том, что при удалении иона меди из белка последний теряет свою активность, а при обратном введении данного иона в апо-белок каталитическая активность его возобновляется . Таким образом, была однозначно установлена необходимость присутствия медьсодержащего центра 2 типа в большинстве "неголубых" оксидаз. В случае Ро1урогиз лак-казы удается избирательно удалить один ион меди из центра 2 типа, что сопровождается потерей каталитической активности, хотя в молекуле белка остается еще три атома меди /27/. При обратном введении недостающего иона меди активность белка восстанавливается. Аналогичное удаление и последующее встраивание меди в ходе реакции ЦП —» апо-ЦП приводит к обратимому исчезновению и появлению ферментативной активности /22/.
Оксидазную активность ЦП ингибируют многие вещества, но наиболее сильное воздействие оказывают анионы. Благодаря изучению оптических и ЭПР-спектров ЦП и лакказы, известно, что такие анионы, как цианиды СЫ~, азиды Ы3~, фториды Б~, в малых концентрациях избирательно связываются только с ионами меди 2 типа. Связывание только одной молекулы азида на четыре атома меди полностью тормозит оксидазную активность белка. Торможение цианидом требует две молекулы ингибитора. Такое различие, по-видимому,